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[药学] 漏芦提取物对四氯化碳致肝纤维化大鼠SOD,MDA及α平滑肌肌动蛋白表达的影响

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发表于 2014-8-19 22:03:50 | 显示全部楼层 |阅读模式
【摘要】  目的观察漏芦提取物对四氯化碳致肝纤维化大鼠超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)及α平滑肌肌动蛋白(αSMA)表达的影响。方法50只雄性大鼠随机分为正常组、模型组、给药组和秋水仙碱组,并以灌胃的方式给药,比色分析法测血清SOD活性和MDA含量,同步。观察漏芦提取物对四氯化碳致肝纤维化大鼠肝病理组织学的影响。结果漏芦给药组肝纤维化指标SOD活性明显高于模型组(P<0.05),血清MDA含量较模型组明显降低;αSMA表达明显低于模型组。 结论漏芦提取物对四氯化碳致肝纤维化大鼠有一定的保护作用。

【关键词】  漏芦 肝纤维化 大鼠


  Effect of Radix Rhapontical Extract on SOD, MDA and αSMA in Rats with Liver Fibrosis Induced by CCl4

   Abstract:Objective To study the effect of effect of Radix Rhapontical extract on SOD, MDA and αSMA in rats with Liver Fibrosis Induced by CCl4. Methods 50 male rats were divided into normal, model, Radix Rhapontical and colchicin group. The activity of SOD and the content of MDA were investigated using colorimetric measurement. Degrees of fibrosis and αSMA were determined by histopathology under microscope. Results The activity of SOD was higher than that of Radix Rhapontical group and the content MDA decreased; αSMA expression showed that the degrees of liver fibrosis in Radix Rhapontical group was slighter than that of model group. Conclusion Radix Rhapontical Extract is able to protect liver fibrosis induced by CCl4 in rats.

  Key words:Radix Rhapontied;  Liver fibrosis;  Rats

    漏芦(Radix Rhaponticl)属菊科植物,分布于陕西、辽宁、山西及吉林等省,其主要成分为挥发油,有清热解毒、消痈、下乳及舒筋通脉等功效。本研究采用四氯化碳诱导大鼠肝纤维化,观察漏芦提取物对四氯化碳致肝纤维化大鼠的保护作用。

  1  材料与方法

  1.1  材料

  1.1.1  漏芦生物活性成分的制备  漏芦采集于吉林省延吉市市郊,经延边大学药学院刘永镇教授鉴定为正品。水提取物:漏芦根加水煎煮3次,做成水煎液,浓缩成1 ml含有4 g生药。

  1.1.2  试剂秋水仙碱,Serva公司产品;SOD,MDA试剂盒为南京建成生物工程研究所产品;α平滑肌肌动蛋白试剂盒为天津TBD生物技术有限公司产品。

  1.1.3  动物 Wistar雄性大鼠,体重为180~200 g,由延边大学医学部动物科提供。

  1.2  方法取Wistar雄性大鼠50只,分为正常组、模型组、漏芦大小剂量组、秋水仙碱组。除正常组外,每组大鼠首次皮下注射CCl4 5.0 ml/kg,以后每周2次皮下注射40%CCl4色拉油3 ml/kg,共6 周;造模的同时,给药组分别给予0.5,0.25 g/kg漏芦提取物,秋水仙碱组按0.1 mg/kg剂量灌胃。第6周,摘眼球取血,分离血清,用比色分析法测定SOD,MDA的含量,天狼猩红染色观察α平滑肌肌动蛋白的表达。取肝左叶,10%福尔马林固定,石蜡包埋,5 μm连续切片,HE染色,观察组织学变化,将肝纤维化分为0~4级[1],0级:无纤维化;Ⅰ级:纤维结缔组织仅局限于汇管区或汇管区扩大有向小叶发展的趋势;Ⅱ级:纤维结缔组织增生进入肝小叶2/3并有Ⅰ级同样的改变;Ⅲ级:纤维结缔组织进入肝小叶达中央静脉周围;Ⅳ级纤维结缔组织在全小叶多处弥漫性增生,假小叶形成并有Ⅲ级同样改变。

  1.3  统计学处理肝纤维化分级结果比较采用等级资料的秩和检验,两组比较采用t检验。  2  结果

  2.1  一般情况模型组大鼠毛质粗糙,消瘦,厌食,精神萎靡,动作迟钝,死亡4只;漏芦给药组、秋水仙碱组大鼠体重与正常组无明显差别,毛质光滑,进食良好,活泼好动,其中漏芦给药组死亡4只,秋水仙碱组死亡3只。

  2.2  各组大鼠肝组织病理变化模型组肝细胞有广泛的点状坏死,伴炎症细胞浸润,肝细胞增生较为明显,汇管区结缔组织增生。秋水仙碱组、漏芦给药组变化类似。其肝细胞呈点状坏死,炎症细胞浸润轻于模型组。结果见表1。表1  各组大鼠组织学变化(略)

  2.3  各组大鼠血清SOD,MDA的变化结果见表2。模型组SOD活性下降,MDA含量升高,而漏芦给药组SOD活性升高、MDA含量下降,但秋水仙碱组无明显变化。

  2.4  各组大鼠肝组织α平滑肌肌动蛋白染色检测结果 正常组肝实质未见阳性反应;模型组肝组织纤维增粗,汇管区胶原纤维增生较多;而秋水仙碱组、用药组大鼠肝组织仅在汇管区及纤细的纤维隔处呈少量的阳性反应,明显少于模型组。表2  各组大鼠血清SOD活性、MDA含量的变化(略)

  3  讨论

    肝纤维化是慢性肝病的基本病理特征,也是进一步向肝硬化发展的主要中间环节,其特征为肝脏细胞外基质大量沉积。近年来研究认为[2],当肝脏受到物理、化学及生物因素的刺激时,肝星状细胞(HSC)增殖并激活,转变为肌成纤维细胞(MFB),通过旁分泌和自分泌作用,合成大量的细胞外基质,并表达α平滑肌肌动蛋白(αSMA)。因此,αSMA被认为是激活的MFB的特征性标记物。现已知,秋水仙碱是有效的抗纤维化药物,可抑制微管蛋白的合成,体外能刺激胶原酶的合成,促进胶原分解。实验表明,漏芦给药组αSMA表达较模型组明显减轻,与秋水仙碱组相似,提示漏芦有良好的抗肝纤维化的作用,其机制可能与抑制HSC的活化有关。

    CCl4是目前诱导发生肝纤维化的常见化学毒物,自由基及其引发的脂质过氧化是其引起肝损伤肝纤维化的主要机制。活性氧、超氧阴离子在体内产生的自由基通过脂质过氧化损伤破坏肝细胞,产生脂质过氧化物直接刺激或通过肝细胞、枯否氏细胞、内皮细胞等旁分泌刺激HSC使其活化。脂质过氧化肝脏炎症损伤是发展至肝纤维化的桥梁。SOD为高效清道夫,可抑制自由基启动的脂质过氧化,其变化可间接反应疾病情况下自由基的变化。MDA是脂质过氧化的最终产物,可严重破坏细胞膜的结构,导致细胞肿胀,坏死,其含量反映了组织过氧化的损伤程度。本次研究结果显示,漏芦给药组SOD活性与模型组比较明显升高,MDA含量则明显降低,这一作用为秋水仙碱所不具备,提示在肝纤维化大鼠模型中,漏芦提取物有清除活性氧及抗脂质过氧化作用,能够拮抗CCl4的毒性。



【参考文献】
    [1]Hauasaky A,Saiaho.Serum markers as tools to monitor liver fibrosis[J].Digestion,1998,59(4):381.

  [2]乐小华,李美忠,杨桂林,等.肝星状细胞活化与肝纤维化分期和血清学指标的关系[J].实用医学杂志,2002,18(10):1051.

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