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作者：李海燕 孙明谦 睢诚 金向群
【摘要】 目的建立测定固本咳喘片中五味子醇甲含量的方法。方法采用高效液相色谱法。色谱柱为Diamonsil C18柱（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇水（47∶53）；流速1.0 ml/min；检测波长为250 nm。结果五味子醇甲回归方程Y=1 119 324.3x-15.94，r=0.999 98，线性范围为0.64～3.2 μg（n=6，RSD=0.44%），平均回收率为100.64%。结论 所建方法简便可行，重复性好，适用于固本咳喘片的质量控制。
【关键词】 高效液相色谱 五味子醇甲 固本咳喘片
Abstract：ObjectiveTo develop an HPLC method for determination of schisandrin in Gubenkechuan Tablet.MethodsThe schisandrin was determined by HPLC with a C18 column（200 mm ×4.6 mm,5 μm） and detected at 250 nm. The mobile phase was methanol -water（47∶53）, the flow rate was 1.0 ml/min. ResultsThe regression equation for schisandrin was Y=1 119 324.3x-15.94，r=0.999 98 and the linear range was 0.64～3.2 μg（n=6，RSD=0.44%）.The average recovery of schisandrin was 100.64%.ConclusionThe method is sensitive,rapid and accurate for the determination of schisandrin in Gubenkechuan Tablet.
Key words：HPLC; Schisandrin; Gubenkechuan tablet
固本咳喘片收载于2005年版《中国药典》，是由党参、白术、茯苓、麦冬、甘草、五味子、补骨脂等7味药材经加工制成的复方制剂，具有益气固表、健脾补肾之功效，临床上用于慢性支气管炎、肺气肿、支气管哮喘、支气管扩张等症状的治疗。临床研究表明该药具有明显预防和减轻慢性阻塞性肺病急性加重的作用［1］，并对喘息型慢性支气管炎及咳嗽变异性哮喘有明显的治疗作用［2～4］，2005年版《中国药典》采用HPLC法测定了该制剂中补骨脂和异补骨脂素的含量［5］，邢旺兴等［6］亦采用毛细管气相色谱法测定了固本咳喘片中补骨脂和异补骨脂素的含量，为了更好的控制该制剂的质量，本实验建立了固本咳喘片中五味子醇甲的含量测定方法。
1 仪器与试药
岛津高效液相色谱仪：LC-10A液相色谱仪、SPD-10Avp检测器、2010色谱工作站、KQ-250型超声波处理器。五味子醇甲对照品购于中国药品生物制品检定所；甲醇为色谱纯；水为二蒸水；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥24 h的五味子醇甲对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.3 mg的溶液，即得。
2.2 供试品溶液的制备取固本咳喘片适量，除去包衣后研细，取约1.5 g，精密称定，置索氏提取器中，用甲醇提取至无色，滤液上中性氧化铝柱（10 g），用甲醇冲洗至无色，蒸干甲醇后，残渣用甲醇定容至5 ml量瓶中，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。
2.3 色谱条件及系统适用性实验色谱柱为Diamonsil C18柱（5 μm，4.6 mm×200 mm）；流动相为甲醇水（47∶53）；流速为1.0 ml/min；检测波长为250 nm；柱温为室温；理论塔板数按五味子醇甲峰计算应不低于3 000。
2.4 测定法分别精密吸取对照品5 μl及供试品溶液20 μl，注入液相色谱仪，测定，即得。液相色谱图见图1。
图1 五味子醇甲对照品（A）、供试品(B)和阴性样品(C) 的HPLC图谱（略）
2.5 线性范围的考察精密称取五味子醇甲对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.32 mg的溶液，精密吸取此溶液各2，4，6，8，10 μl分别注入液相色谱仪，测定，记录色谱峰面积。以峰面积值为纵坐标，进样量为横坐标进行线性回归，回归方程为Y=1 119 324.3X－15.94，r=0.999 98，结果表明五味子醇甲进样量在0.64～3.2 μg之间，进样量与峰面积值呈良好的线性关系。 2.6 精密度考察取同一供试品溶液，重复进样6次，计算相对标准偏差，五味子醇甲的RSD值为0.80%。
2.7 重现性实验 取同一批的固本咳喘片6份，除去包衣后研细，每份取约1.5 g，精密称定，按“2.2”项下的方法操作，制备供试品溶液，测定含量，五味子醇甲的含量的平均值为0.017 2%，RSD为0.642%。
2.8 稳定性实验 分别取放置4，8，12，16，20，24 h的供试品溶液，测定固本咳喘片中五味子醇甲的含量，以考察其稳定性。RSD为1.53%，表明供试品溶液至少在24 h内稳定。
2.9 加样回收率实验精密称取五味子醇甲对照品适量，加入到已测知五味子醇甲含量的固本咳喘片（五味子醇甲的含量为0.017%；详见重现性实验）中，按“2.2”项下方法操作，制备供试品溶液，测定五味子醇甲的含量，计算回收率。结果见表1。
表1 五味子醇甲回收率实验结果（略）
2.10 样品中五味子醇甲的含量测定 按“2.2”项下方法操作，制备供试品溶液，测定10批固本咳喘片中五味子醇甲的含量。测定结果见表2。
表2 固本咳喘片中五味子醇甲的含量测定结果（略）
3 讨论
五味子醇甲是五味子的活性成分，作为测定指标来评价制剂的质量是较为适宜的，本实验采用HPLC法测定了固本咳喘片中五味子醇甲的含量。为该制剂提供了新的含量测定方法和依据。
在供试品溶液的制备时，比较了超声提取和索氏提取的区别。结果表明，超声提取不完全，且条件较难控制，故本实验选用了索氏提取的方法。
对供试品溶液制备方法曾进行优化，采用乙醇、30％乙醇、甲醇，水为提取溶剂，实验结果发现以甲醇提取的样品中五味子醇甲的含量较高，而且甲醇提取物过滤较易，故实验选用甲醇为提取溶剂。
甲醇提取的样品经HPLC分离后，发现干扰较大，影响测定结果，但经中性氧化铝柱处理，可将干扰物质除去。
【参考文献】
［1］ 王翼洲，张 琳，武 慧.固本咳喘胶囊对慢性阻塞性肺病急性加重干预效应的研究［J］.齐齐哈尔医学院学报，2004 25（8）：847.
［2］ 徐天景，应丹松.中西医结合治疗喘息型慢性支气管炎临床观察［J］.中医药临床杂志，2005 17（4）：380.
［3］ 邹超英，孙亦斌. 中西医结合治疗咳嗽变异性哮喘62例临床观察［J］.实用中西医结合临床，2005，5（3）：45.
［4］ 徐天景，应丹松. 中西医结合治疗喘息型慢性支气管炎临床观察［J］.中医药临床杂志，2005，17（4）：380.
［5］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：493.
［6］ 邢旺兴，陈 斌.毛细管气相色谱法测定固本咳喘片中补骨脂素和异补骨脂素的含量［J］.药学实践杂志，2002，20（2）：96. |
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发表于 2014-8-19 16:42:17
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