|
|
作者：吕本强， 张永勇, 罗佳波
【摘要】 目的研究双黄连粉针剂的化学成分，为明确双黄连粉针剂药效、毒效的物质基础提供依据。方法应用各种色谱方法对其化学成分进行分离，并利用各种色谱和光谱技术鉴定所分离得到的化学成分。结果从双黄连粉针剂中分离得到6个化合物，经鉴定分别为：黄芩苷（baicalin，Ⅰ）、大黄酚（chrysophenol，Ⅱ）、绿原酸（chlorogenic acid，Ⅲ）、芦丁（rutin，Ⅳ）、异虎耳草素（isopimpinellin，Ⅴ）和槲皮素（quercetin，Ⅵ）。结论除黄芩苷（baicalin，Ⅰ）、绿原酸（chlorogenic acid，Ⅲ）外，其它4种化合物均系从该制剂中首次分得。
【关键词】 双黄连粉针剂； 化学成分； 分离鉴定
Abstract：ObjectiveTo study the chemical constituents from Shuanglhuanglian injection. MethodsShuanghuanglian injection was manufactured according to Chinese Pharmacopoeia (2005), and separated with column chromatography. Structures of the compounds were identified by their physical-chemical character and spectral analysis.ResultsSix compounds were isolated from Shuanghuanglian Injection. They were baicalin (Ⅰ),chrysophenol (Ⅱ),chlorogenic acid (Ⅲ),rutin (Ⅳ),isopimpinellin (Ⅴ) and quercetin (Ⅵ).ConclusionCompoundsⅡ,Ⅳ,Ⅴ and Ⅵ were isolated from Shuanghuanglian injection for the first time.
Key words：Shuanghuanglian injection; Chemical constituents; Isolation and identification
双黄连粉针剂是由金银花、黄芩、连翘3味中药经提取精制而成的纯中药复方制剂，具有清热解毒、清凉解表的功能，主要用于外感风热引起的发热、咳嗽以及多种上呼吸道感染病症，已成为中医药治疗呼吸道感染性疾病的首选药物之一，该药是具有抗病毒及抗细菌双重治疗作用的药物，199212被国家中医药管理局指定为全国中医医院急诊首批急诊必备中成药［1］。 但随着用药人群的增加，其不良反应报道也日益增多，主要表现在过敏反应（包括皮肤反应、过敏性休克、血管神经性水肿等）；消化系统反应和静脉炎及其它等［2］。导致其不良反应产生的原因有个体、制剂、用法与用量等诸多因素，本研究从制剂本身入手，对其化学成分进行分离、鉴定，探索其药效、毒效的物质基础。本文报道了其中6个化合物的分离和结构鉴定，其中化合物Ⅱ，Ⅳ，Ⅴ和Ⅵ为首次在该制剂中分得。
1 仪器和材料
XT-4型显微熔点测定仪(温度计未校正)；JASCO FI/IR-480 Plus Fourier Transform红外光谱仪；BRUKER DRX400型核磁共振仪；Finnigan LCQ Advantage MAX质谱仪；制备型高效液相色谱仪（Gilson公司），柱层析硅胶为青岛海洋化工厂产品；硅胶GF254薄层预制板、制备薄层为烟台化学工业研究所产品；所用化学试剂均为分析纯。连翘来源于河南，金银花来源于山东，黄芩来源于河北，购于广州市健禾药材公司，由本室鉴定。
2 方法与结果
2.1 制备与分离按2005年版《中国药典》注射用双黄连（冻干粉）项下制法，取一定比例金银花、连翘和黄芩共15 kg。将黄芩水提，然后采用酸沉碱溶法处理，所得沉淀乙醇洗涤后干燥，备用；再将金银花和连翘混和水提，然后采用水提醇沉法处理，滤取上清液，回收乙醇并浓缩得稠浸膏，备用。将两部分原料混和，溶解于水，冷冻干燥，即得注射用双黄连制剂。取自制注射用双黄连甲醇溶液，浓缩，经反复聚酰胺（乙醇-水梯度洗脱）、硅胶柱层析（氯仿-甲醇梯度洗脱），结合制备薄层和制备液相分离得到化合物Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ和Ⅵ。
2.2 鉴定
2.2.1 化合物Ⅰm.p.260～261℃。盐酸-镁粉反应阳性。IR（KBr）γcm-1：3 380，3 260，1 660，1 600，1 572，1 551，1 495，1 451，1 407，1 253，1 201，1 146，912。ESI-MS（m/z）：446（M）+，445（M-H）—。1H-NMR（DMSO-d6）δppm：12.58（1H，s，5-OH），8.63（1H，s，6-OH），8.07（2H，dd，J=1.8Hz，J=8.0Hz，2′、6′-H），7.60（3H，m，3′、4′、5′-H），7.05（1H，s， 3-H），7.00（1H，s，8-H），5.48（1H，s，1″-H）。13C-NMR（DMSO-d6）δppm：163.5（C-2），106.1（C-3），182.5（C-4），146.8（C-5），129.1（C-6），151.3（C-7），93.8（C-8），149.2（C-9），104.7（C-10），130.8（C-1′），126.3（C-2′），129.1（C-3′），132.0（C-4′），129.1（C-5′），126.3（C-6′），100.0（C-1″），72.8（C-2″），75.3（C-3″），71.3（C-4″），75.5（C-5″），170.0（C-6″）。以上ESI-MS、1H谱和13C谱数据与文献［3］基本一致，故确定化合物Ⅰ为黄芩苷（baicalein）。
2.2.2 化合物Ⅱ黄色片状结晶（氯仿），mp.190～192℃。 IR（KBr）γcm-1：3 432，1 677，1 606，1 569，903，868，839。EI-MS（m/z）：254，226，197。1H-NMR（CDCl3）δppm：12.07（1H，s，8-OH），11.95（1H，s，1-OH），7.78（1H，d，J=7.5Hz，5-H），7.64（1H，t，J=8.2Hz，6-H），7.60（1H，brs，4-H），7.26（1H，d，J=8.6 Hz，7-H），7.06(1H，s，2-H)，2.45（3H，s，-CH3）。13C-NMR（CDCl3）δppm：162.7（C-1），124.5（C-2），149.3（C-3），121.3（C-4），119.9（C-5），136.9（C-6），124.3（C-7），162.5（C-8），192.4（C-9），181.8（C-10），133.3（C-4a），133.7（C-10a），115.9（C-8a），113.8（C-9a），22.2（-CH3）。以上数据与文献［4］数据基本一致，故鉴定化合物Ⅱ为大黄酚（chrysophenol）。
2.2.3 化合物Ⅲ无色针状结晶（甲醇）,mp.207～209℃。IR（KBr）γcm-1：3 342，3 500～2 500，2 924，1 680，1 633，1 596，1 524。EI-MS（m/z）：354，336，180，163，136。1H-NMR（CD3OD）δppm：7.55（1H，d，J=16Hz，7′-H），7.04（1H，d，J=2.0Hz，2′-H），6.95（1H，dd，J=8.4、2.0Hz，6′-H），6.77（1H，d，J=8.4Hz，5′-H），6.25（1H，d，J=16Hz，8′-H），2.12（4H，m，2，6-H），3.75（1H，dd，J=8.4、3.2Hz，4-H），4.17（1H，m，5-H），5.32（1H，m，3-H）。13C-NMR（CD3OD）δppm：177.8（COOH），169.4（C-9′），150.3（C-4′），147.8（C-7′），147.6（C-3′），128.6（C-1′），123.7（C-6′），117.2（C-5′,8′），116.0（C-2′），76.9（C-1），74.2（C-4），72.7（C-5），72.0（C-3），39.5（C-2），39.0（C-6）。上述数据经与文献［5，6］对照，基本一致，故确定化合物Ⅲ为绿原酸（chlorogenic acid）。 2.2.4 化合物Ⅳ淡黄色粉末（甲醇），m.p.176～178℃。盐酸-镁粉反应阳性。IR（KBr）γcm-1：3 423，2 938，1 655，1 601，1 506，1 458，1 204，910。ESI-MS（m/z）：610 (M)+。1H-NMR（DMSO-d6）δppm：6.20（1H，d，J=2.0Hz，6-H），6.39（1H，d，J=2.0Hz，8-H），6.85（1H，d，J=8.8Hz，5′-H），7.56（1H，d，J=2.1Hz，2′-H）,7.54（1H，dd，J=8.8、2.1Hz，6′-H），5.35（1H，d，J=7.4Hz，1″-H），5.24（1H，s，1′″-H）。13C-NMR（DMSO-d6）δppm：156.6（C-2），133.3（C-3），177.3（C-4），161.2（C-5），98.6（C-6），164.0（C-7），93.5（C-8），156.4（C-9），104.0（C-10），121.5（C-1′），115.2（C-2′），144.7（C-3′），148.4（C-4′）， 116.3（C-5′），121.2（C-6′），101.2（C-1″），74.1（C-2″），76.4（C-3″），76.4（C-4″），75.9（C-5″），67.0（C-6″），100.7（C-1′″），70.5（C-2″′），70.3（C-3′″），71.8（C-4″′），68.2（C-5′″），17.7（C-6″′）。以上数据经与文献［7，8］对照，确定化合物Ⅳ为芦丁（rutin）。
2.2.5 化合物Ⅴ浅黄色针状结晶（丙酮），m.p.145℃～146℃。异羟污酸铁反应阳性。IR（KBr）γcm-1：1719，1593，1483，1350，1204，1145，1072，824，755。ESI-MS（m/z）：246（M）+。1H-NMR（CDCl3）δppm：8.12（1H，d，J=9.6Hz，4-H），7.63（1H，d，J=2.4Hz，2′-H），6.99（1H，d，J=2.4Hz，3′-H），6.28（1H，d，J=9.6Hz，3-H），4.17、4.16（6H，s，5、8-OCH3）。13C-NMR（CDCl3）δppm：160.4（C-2），150.1（C-7），145.2（C-2′），144.3（C-5），143.8（C-9），139.4（C-4），128.3（C-8），114.9（C-6），113.0（C-3），107.8（C-10），105.1（C-3′），61.7、60.9（5、8-OCH3）。以上光谱数据与文献［9，10］报道的异虎耳草素（5，8-二甲氧基补骨脂素）数据对照基本一致，故鉴定化合物Ⅴ为异虎耳草素（isopimpinellin）。
2.2.6 化合物Ⅵ黄色粉末结晶（乙醇），温度达310℃以上分解。盐酸-镁粉反应阳性。IR（KBr）γcm-1：3 377，3 296，1 671，1 616，1 552，1 514，1 458，1 429，1 365，1 212，1 095，810。ESI-MS（m/z）：302（M）+，301（M-H）+。1H-NMR（DMSO-d6）δppm：12.48（1H，s，5-OH），10.73（1H，s，7-OH），9.53（1H，s，3-OH），9.29（1H，s，3′-OH），9.25（1H，s，4′-OH），7.68（1H，d，J=2.0Hz，2′-H），7.53（1H，dd，J=8.4、2.0Hz，6′-H），6.89（1H，d，J=8.4Hz，5′-H），6.40（1H，d，J=2.0Hz，8-H），6.19（1H，d，J=2.0Hz，6-H）。13C-NMR（DMSO-d6）δppm：146.8（C-2），135.7（C-3），175.8（C-4），160.7（C-5），98.1（C-6），163.8（C-7），93.3（C-8），156.1（C-9），103.0（C-10），121.9（C-1′），115.6（C-2′），145.0（C-3′），147.7（C-4′），115.1（C-5′），119.9（C-6′）。以上光谱数据与文献［11，12］报告的槲皮素相一致，故确定化合物Ⅵ为槲皮素（quercetin）。
3 讨论
目前对双黄连粉针剂化学成分的分离工作进行得不多，本文报道了其中6种成分的分离与鉴别工作，后续研究尚在进行。结合药理、毒理实验明确双黄连、粉针剂的物质基础，对其“减毒增效”，二次开发应用具有十分重要的作用。
【参考文献】
［1］宫 涛,刘 阳,张伯礼.310例双黄连注射剂不良反应分析［J］.天津中医学院学报,2003,22(1)：49.
［2］马寿刚,赵德运,毛菜香.双黄连针剂的不良反应综述［J］.儿科药学杂志,1999,5（4）：38.
［3］张中朋,杨中林,唐登峰,等.地蚕化学成分的分离与鉴定［J］.中成药,2004,26（12）：1051.
［4］敏 德,徐丽萍,张治针,等.天山大黄的化学成分研究(1)［J］.中国中药杂志,1998,23(7):416.
［5］孙燕荣,董俊兴,吴曙光.杜仲化学成分研究［J］.中药材,2004,27(5):341.
［6］凌 云,鲍燕燕,张永林,等.兴安蒲公英的化学成分研究［J］.中草药,2000,31(1):10.
［7］蒋受军,魏 峰,鲁 静,等.小野芝麻的化学成分研究［J］.中国药科大学学报,2002,33（6）：487.
［8］杨念云,田丽鹃,钱士辉,等.野马追地上部分的化学成分研究（Ⅱ）［J］.中国天然药物,2005,3（4）：224.
［9］饶高雄,杨祺,蔡锋,等.牛尾独活的化学成分［J］.云南中医学院学报,1994,17（3）：4 .
［10］周 燕,彭树林,吕发强,等.川明参的化学成分［J］.天然产物研究与开发,1999,11（6）：15.
［11］滑 艳,何 荔,汪汉卿.香青黄酮类化合物的研究［J］.中国中药杂志,2003,28(6):530.
［12］吴迎春,张尊听,甄宝勤,等.贯叶连翘化学成分分析［J］.西北农林科技大学学报（自然科学版）,2004,32（6）：99. |
|
|Archiver|手机版|小黑屋|魅优论文范文网
( 琼ICP备10200388号-7 )
发表于 2014-8-16 23:02:20
收藏
转播
支持
反对