大黄素纳米脂质体的制备和质量评价

JZ041567

      作者：顾宜，石玉，张三奇，薛克昌，李煜楠


　　【关键词】 大黄素；纳米脂质体；制备
　　1材料和方法
　　1.1材料RE52旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；KQ250超声波发生器（江苏昆山淀山湖检测仪器厂）；UV265紫外分光光度计（日本岛津）；LC10Avp高效液相色谱仪（日本岛津），Kromasil C18色谱柱（4.6 mm×150.0 mm，5 μm）；TEM2000EX透射电子显微镜（日本电子）. 胆固醇（上海生化试剂公司），磷脂（注射用，上海太伟药业有限公司），大黄素（emodin,自制），无水乙醇、氯仿、葡萄糖均为分析纯.
  
　　1.2方法精密称取处方量的大黄素、胆固醇、磷脂于250 mL园底烧瓶中，加氯仿20 mL溶解，于旋转蒸发仪上减压蒸发除去氯仿. 加入60 g・L-1葡萄糖液10 mL得脂质体粗混悬液，冷水浴超声2次，每次1.0 min，0.8 μm微孔滤膜过滤，得到脂质体胶体溶液. 取脂质体加水稀释，用20 g・L-1的磷钨酸钠染色，在透射电镜下观察粒子形态. 按均匀设计法U7(76)表及其实用表，大黄素用量固定，选取磷脂与胆固醇的比例接近2∶1，3∶1和1∶1的第2，4，6组制备脂质体，紫外分光光度法测定脂质体中大黄素含量［精密量取大黄素纳米脂质体0.4 mL，用乙醇2 mL稀释，在最大吸收波长439 nm处测定吸光度，按吸光度A对浓度C线性回归方程A=8.238×10-3 +3.577×10-3C   r=0.9993 (n=6)计算含量］，并与大黄素理论含量比较，确定制备大黄素纳米脂质体的磷脂与胆固醇的最佳比例. 然后以该比例，设计不同载药量制备大黄素纳米脂质体，观察其稳定性. 取大黄素纳米脂质体1 mL上SephadexG50层析柱，水洗脱流速0.5 mL・min-1，每2 mL收集1管，用HPLC［1］［流动相：甲醇∶1 g・L-1磷酸（90∶10）；流速1.0 mL・min-1；紫外检测波长254 nm］测定纳米脂质体和游离药物含量. 包封率%=（W总-W游）/W总×100%，W总表示总药物量；W游表示游离药物量. 载药量%=（W总-W游）/W载×100%，W载表示载体材料量.
　　2结果
　　2.1大黄素纳米脂质体处方的确定磷脂与胆固醇比例1∶1所制备的大黄素纳米脂质体中大黄素的实际含量与理论含量浓度比值最高，所以该比例为制备大黄素纳米脂质体的最佳比例. 在此比例下载药量为4%样品的实际含量与理论含量浓度比值最高，放置1 wk后，仍为浅黄色透明胶体，无沉淀发生. 因此确定大黄素纳米脂质体处方为：大黄素1.0 mg，磷脂12.5 mg，胆固醇12.5 mg.
　　2.2大黄素纳米脂质体的质量评价大黄素纳米脂质体为浅黄色透明胶体，在透射电镜下，呈完整圆球形或椭圆形的球粒，粒径较均匀，约为25 nm（图1）. 3批大黄素纳米脂质体的含量为（0.11±0.01） g・L-1，载药量为(4.07±0.07)%，包封率为(98.45±0.22)%.  
　　图1 大黄素纳米脂质体透射电镜观察TEM×50 000（略）
　　3讨论
　　大黄素具有强亲脂性，制成脂质体是增加水中溶解度的良好方法. 采用薄膜超声分散法制备脂质体简便易行，适合于实验室制备和研究. 磷脂是细胞膜组成成分，毒性低于合成材料，体内可以降解且有良好生理相容性，价廉易得，故选其作为药物载体. 曾考察生理盐水、60  g・L-1葡萄糖水溶液作分散介质的效果，采用生理盐水作分散介质的大黄素纳米脂质体放置后混浊、分层，而60 g・L-1葡萄糖水溶液作分散介质在室温放置1 wk无混浊现象. 大黄素具有保肝作用［2］，本实验制备的大黄素纳米脂质体粒径约25 nm，从理论上分析有肝靶向性，其在动物体内的药动学和药效学正在研究之中.
　　【参考文献】
　　［1］ Feng SL, Chen LR. Determination of rhein, emodin and tanshinone ⅡA in Dahuang Jiangzhi powder by HPLC ［J］. Yaowu Fenxi Zazhi（J Chin Pharm Anal）, 2000;20(6):368-370.
　　［2］ Zhan YT, Li DG, Wei HS, Wang ZR, Huang X, Li ZD, Xu QF, Lu HM. Effect of emodin on development of hepatic fibrosis in rats ［J］. Zhongguo Zhongxiyi Jiehe Zazhi （Chin J Intergr Tradit Western Med）,  2000;20(4):276-279.