甘草酸对哮喘小鼠气道炎症及磷脂酶A2活性的影响

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【摘要】  目的观察甘草酸对哮喘小鼠气道炎症及磷脂酶A2活性的影响。方法建立小鼠卵蛋白哮喘模型, 测定支气管肺泡灌洗液(BALF) 中白细胞总数及嗜酸粒细胞(EOS)计数及用盐酸滴定法测定肺组织和血清中磷脂酶A2活性。结果甘草酸能显著降低小鼠BALF中炎性细胞总数、EOS数量及磷脂酶A2活性。结论 甘草酸具有抗气道炎症及降低磷脂酶A2活性的作用。

【关键词】  甘草酸 支气管哮喘 气道炎症 磷脂酶A2

　　The Effect of Glycyrrhizin on Airway Inflammation and PLA2  Activity in Mice Asthmatic Model

　　Abstract：ObjectiveTo explore the effect of glycyrrhizin on airway inflammation and PLA2  activity in the mice asthmatic model. MethodsThe mice model of bronchial asthma was built up. The number of total leukocytes and eosinophils in bronchoalve-olar lavage fluid(BALF) was measured by microscope. The PLA2 activity of pulmonary tissue and serum were assayed by the hydrochloric acid titration method.ResultsGlycyrrhizin reduced the amount of inflammatory cells in BALF and inhibit the PLA2 activity.ConclusionGlycyrrhizin can inhibit the airway inflammation and the PLA2 activity.

　　Key words：Glycyrrhizin;  Bronchial asthma;  Airway inflammation;  PLA2

    支气管哮喘是一种气道变应性炎症，有多种炎症细胞、炎性介质和细胞因子参与的炎症过程。磷脂酶A2是一种蛋白水解酶，广泛存在于炎性细胞的生物膜上，对白三烯、前列腺素及血小板激活因子等炎性介质的生成有重要作用，并参与了哮喘的一系列病理生理过程［1］。甘草酸是从甘草中分离出来的三萜类成分，具有抗炎、抗过敏、抗变态反应等作用［2］。本研究通过观察甘草酸对哮喘小鼠气道炎症及肺组织和血清中磷脂酶A2活性的影响，探讨甘草酸对哮喘小鼠炎症反应的抑制作用。

　　1  材料和方法

　　1.1  动物分组

　　清洁级BALB/ｃ雌性小鼠40只, 8周龄, 体重（25±5）g, 随机分成对照组(Ａ组)、哮喘组(Ｂ组)、泼尼松组(Ｃ组)、甘草酸组(Ｄ组), 每组10只。

　　1.2  试剂与仪器卵蛋白（OVA，V级，美国Sigma），甘草酸（新疆天山制药有限公司），SC-A型超声雾化器（辽宁鞍山医疗电仪器厂），OLYMPUS显微镜(日本)。

　　1.3  小鼠哮喘动物模型的建立 小鼠于第1，7，14天给予腹腔注射10 μg卵蛋白+2 mg氢氧化铝凝胶，用生理盐水稀释到0.5 ml。第21天开始用1%卵蛋白雾化激发，通过人工调节雾化量使雾化吸入箱里卵蛋白颗粒浓度维持在10～20 mg/m3之间, 1次/d，30 min/次，连续7 d。A组小鼠用生理盐水腹腔注射和雾化。每次雾化前C组小鼠给予1.5 mg/kg泼尼松灌胃，D组小鼠给予50 mg/kg甘草酸灌胃, 另两组小鼠给予0.2 ml/10 g生理盐水灌胃。

　　1.4  肺泡灌洗液白细胞总数及嗜酸粒细胞计数检测最后一次雾化吸入后6 h，小鼠眼眶动脉取血处死。放血后给小鼠行气管插管, 用生理盐水1 ml灌洗双肺, 回收灌洗液, 反复3次, 收集的肺泡灌洗液4℃下1 000 r/min离心10 min, 弃上清, 细胞用1 ml Hank液重悬, 取0.1 ml于血细胞计数板计白细胞总数, 取0.2 ml涂片, 瑞吉染液染色, 至少计数400个细胞作细胞分类计数。

　　1.5  PLA2活性的测定取肺组织100 mg，用盐酸滴定法测定肺组织和血清中PLA2的活性，规定在37℃, 每分钟每毫升样本反应消耗1 nmol/L盐酸为1个PLA2活性单位(U) ［3］。

　　1.6  统计分析实验结果以±ｓ表示, 采用SPSS10. 0统计分析软件计算相应的统计学参数。

　　2  结果

　　2.1  各组小鼠BALF中的白细胞总数及EOS计数　

　　哮喘组BALF中的白细胞总数及EOS计数较正常对照组明显升高(P<0.01); 经泼尼松和甘草酸治疗后白细胞总数及EOS计数减少（P<0.05），但高于正常对照组（P<0.05）；泼尼松组和甘草酸组之间无显著性差异（P>0.05）。 结果见表1。表1  各组BALF中白细胞总数和EOS计数(略)

　　2.2  各组小鼠肺组织和血清磷脂酶A2活性的变化哮喘模型组小鼠肺组织和血清中磷脂酶A2活性高于正常对照组（P<0.05），经泼尼松和甘草酸治疗后肺组织和血清中磷脂酶A2活性均降低，与哮喘模型组相比有统计学差异（P<0.05）。泼尼松组与甘草酸组之间无显著性差异（P>0.05）。结果见表2。表2  各组小鼠肺组织和血清PLA2活性的变化(略)　3  讨论

    支气管哮喘是一种以嗜酸粒细胞等反应为主的气道反应性炎症和以气道高反应为特征的疾病。目前认为, 气道炎症是哮喘气道高反应的基础, 而在哮喘的支气管粘膜的特征性炎症中EOS是关键的效应细胞［4］。本研究结果显示哮喘模型小鼠肺泡灌洗液细胞总数较正常对照组明显增多，嗜酸性粒细胞计数增多，符合变应性气道炎症的病理改变。甘草酸显著减少炎性细胞的数量及嗜酸性粒细胞计数，抑制炎性细胞气道内的浸润，说明甘草酸能有效减轻气道炎症。

    近年来越来越多的研究表明磷脂酶A2作为一种维持磷脂代谢及细胞膜稳定的酶类，不仅是启动脂介质合成的关键酶，还能导致多种受体的代谢失衡，激活炎性细胞，参与气道高反应的发生，甚至能直接收缩气道平滑肌，因此在哮喘的发病机制中起重要作用［5］。 体内外研究发现，哮喘者血浆和BALF中PLA2活性及EOS明显升高，两者呈显著性正相关。嗜碱细胞和肥大细胞受抗原刺激后，嗜碱细胞和肥大细胞在IgE介导下脱颗粒，释放AA、组胺、LTs、PGs并分泌IL-4，IL-13等，它们在哮喘发病中均起重要作用。研究发现，抗原刺激嗜碱细胞和肥大细胞脱颗粒时伴随PLA2活性显著升高，在其分泌的颗粒中也检测到PLA2-IIA，它有助于肥大细胞颗粒分泌到胞外而发挥胞外酶活性。此外，在肺泡巨噬细胞、呼吸道上皮细胞中均发现PLA2大量表达和活性增高，它们在哮喘发病中也有重大作用［6］。

    哮喘发作时BALF中检测到磷脂总量减少，而PLA2溶血磷脂酸和游离脂肪酸增高。升高的PLA2降解降解肺泡表面活性物质(PS)致使PS大量减少，肺顺应性下降，呼吸道阻力增加，哮喘症状加重［7］。

    糖皮质类固醇治疗哮喘的机理之一就是通过类固醇受体(GR)活化，与该DNA相互作用，始动特定基因的转录，最终诱导合成一种调脂蛋白。调脂蛋白是体内PLA2的特异性抑制剂。因此，本研究显示甘草酸具有泼尼松一样的作用即抑制哮喘小鼠肺组织和血清PLA2活性，有效地发挥抗炎作用，可能是甘草酸治疗哮喘的重要机理之一。



【参考文献】
  　　［1］孙增涛，张 虹，王德惠，等. 杏贝冲剂对哮喘豚鼠磷脂酶A2 的影响［J］.天津中医，2002, 19(6) :13.

　　［2］Park HY, Park SH, Yoon HK, et al. Anti-allergic activity of 18beta- glycyrrhetinic acid-3-0-beta-D-gluccuronide［J］.Arch Pharm Res. 2004, 27(1): 57.

　　［3］陈思锋，吴中立. 体液和组织磷脂酶A2简便快速测定法［J］.第二军医大学学报，1998，10(3): 254.

　　［4］江荣林，沈华浩. IL5，Eotaxin与支气管哮喘［J］.国外医学·呼吸系统分册, 2004,24 (1) :18.

　　［5］洪 新，杨肇亨，陆松敏. 磷脂酶A2与哮喘豚鼠气道反应性及炎细胞浸润［J］.中华内科杂志, 1996, 35(6) : 403.

　　［6］Aksoy MO, li X , Borenstein M, et al. Effects of topical cofticosteroids on in f1ammatory mediator induced eicosanoid release by human airway epithelial cells［J］.J Allergy Oin Immunol ,1999, 103(6) :1081.

　　［7］樊勇胜，马树林，闫素英. 磷脂酶A2和成肌纤维细胞在哮喘发病机制中的作用［J］.医学综述, 2003, 9(5) : 267.