高效液相色谱法测定市售首乌藤中2,3,5,4四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷的含量

amy54321 · 发表于 2014-8-19 16:42:49

作者：刘善新刘青孙建向寿坤陈柱杉

【摘要】  目的测定济南市售首乌藤中2,3,5,4'四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷含量，同时进行比较。方法采用高效液相色谱法，色谱柱：lichrospher C18柱（4.6 mm×150 mm,5 μm）；流动相：乙腈水（20∶80）,流速：1 ml/min，检测波长320 nm。结果市售首乌藤中二苯乙烯苷含量为0.0179%～0.355%。结论市售首乌藤中二苯乙烯苷含量差距较大，其质量存在比较明显的差异。

【关键词】  高效液相色谱首乌藤 2,3,5,4'四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷

　　Abstract:ObjectiveTo study the quality of Caulis Polygoni Multiflori from different drugstores in Jinan. MethodsHPLC was used with  Lichrospher C18 column(4.6 mm×150 mm, 5 μm), a mobile phase : acetonitrilewater （20∶80）, the flow rate: 1ml/min, the detection wavelength 203 nm.ResultsThe contents of 2,3,5,4'tetrahyroxytilbene2OβDglucoside in Caulis Polygoni Multiflori from different drugstores varied from 0.0179% to 0.3546%.ConclusionThe qualities of Caulis Polygoni Multiflori are different in different drugstores.

　　Key words:HPLC;  Caulis Polygoni Multiflori;  2,3,5,4'tetrahyroxytilbene2OβDglucoside

　　首乌藤又叫夜交藤，是蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的干燥茎藤，为常用中药，有养心安神、祛风通络的功效，其所含化学成分主要有蒽醌类，如大黄素、大黄素甲醚等。二苯乙烯苷类，如2，3，5，4'四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷等以及其它一些成分［1～3］。为了给有效地控制首乌藤的质量提供可靠的含量测定方法，本研究采用HPLC法测定了济南市售首乌藤药材中2，3，5，4'四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷的含量，现报道如下。

　　1  材料

　　1.1  仪器  高效液相色谱仪（美国water公司600），检测器为waters996二级管阵列检测器，泵waters 600，控制器为waters 600，数据处理器为waters M32工作站。

　　1.2 试药乙腈（色谱纯）甲醇（分析纯）水为重蒸水，二苯乙烯苷对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号为110844200505）。

　　1.3 药材  12份首乌藤药材采购于济南市各药店及药材市场，均由山东省中医药研究院钟方晓研究员鉴定为正品。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件与系统适应性实验色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为柱填充剂（江苏汉邦科技有限公司，4.6 mm×150 mm,5 μm）；流动相：乙腈水（20∶80）；流速：1 ml/min；检测波长：320 nm;进样量：10μl；柱温：室温。HPLC图见图1。

　　2.2 对照品溶液制备精密称取2,3,5,4'四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷对照品3.33 mg,置10 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。精密吸取0.5ml对照品溶液于10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得每毫升含16.65 μg对照品溶液。

　　1. 对照品  2.供试品

　　图1  HPLC图谱（略）

　　2.3  供试品溶液制备取首乌藤药材细粉约0.3 g,精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，称定重量，超声提取30 min,补足减失的甲醇量，摇匀，滤过，取续滤液以用0.45 μm滤膜滤过，备用。　　2.4 线性关系考察精密吸取上述对照品储备液5 ml于10量瓶中，加甲醇至刻度摇匀，再精密吸取该溶液0.1，0.2，0.5，1，2 ml于10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。分别进样10 μl，按上述色谱条件测定峰面积积分值。以对照品的峰面积积分值为纵坐标，对照品的进样量为横坐标，进行回归分析，得回归方程：Y=3.75×106+39 161，r=0.999 9。线性范围：0.016 65～0.333 μg。

　　2.5 精密度实验精密吸取供试品溶液10 μl，连续进样5次，测定峰面积积分值， RSD为0.56%，结果表明精密度良好。

　　2.6 稳定性实验在室温条件下，将供试品溶液放置0，2,4,8,10 h,按照上述色谱条件进样10 μl进行测定，记录峰面积积分值，RSD为1.2% ，说明供试品溶液在10 h内稳定。

　　2.7 重现性实验按照样品测定方法，对同一样品进行5次平行的实验，测平均含量，计算RSD为1.13%。

　　2.8 回收率实验称取已知含量的首乌藤药材细粉约0.5 g，6份，精密称定，分别加入二苯乙烯苷0.308 8 mg（对照品溶液浓度为0.154 4 mg/ml,精密加入2 ml），按照样品含量测定方法，进行测定，得平均加样回收率为99.02%，RSD为1.43%。

　　2.9 样品含量测定按照供试品溶液的制备方法制备各样品溶液，上述色谱条件测定峰面积，计算各样品中二苯乙烯苷的含量，结果见表1。

　　表1  市售首乌藤中二苯乙烯苷的含量测定结果（略）

　　3  讨论

　　本文以首乌藤水溶性成分2,3,5,4’四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷为指标，采用HPLC法测定其含量，为建立首乌藤含量测定方法及含量限度提供了依据，从上述济南不同药店的药材测定结果看，有一定的代表性，不同药店的市售样品其二苯乙烯苷的含量差异很大，最低的0.017 9%，最高的为0.355%，最低与最高二苯乙烯苷含量相差20倍以上。由于样品均为市售品，来自济南市售各药店，来自不同的药材市场，分布较广泛，基本上可以代表一定地区当前市场使用的首乌藤的含量现状，但其原产地、采收期及加工方法有所不同，储藏时间不尽相同，这方面对其含量的影响还有待于进一步考察。

　　实验中对提取方法进行了考察，结果超声提取30 min和回流提取30 min同一份样品的含量接近，因此采用超声提取。

【参考文献】
  　　［1］国家药典委员会.中国药典［S］.北京：化学工业出版社，2005：187.

　　［2］连云岚，高天爱,和建国，等.首乌藤质量初探［J］.山西医科大学学报，1998，29（4）：311.

　　［3］汪学昭，娄子洋，陈万生，等.HPLC法测定何首乌药材及不同方法提取物中二苯乙烯苷的含量［J］.中华国际医药杂志，2003，2（2）：86.

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