枫香树叶抗菌活性研究

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   作者：钟有添 王小丽 马廉兰

【摘要】  目的探讨枫香树叶的体外抗菌活性。方法采用琼脂扩散法和试管连续稀释法测定枫香树叶对常见致病菌和条件致病菌的体外抗菌活性及最低抑菌浓度(MIC)。结果枫香树叶对大肠埃希菌、白假丝酵母菌无抗菌作用；枫香树叶对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、福氏志贺氏菌、伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌皆有抗菌作用，抑菌圈直径在13～25 mm之间。不同方法提取的药液的抗菌作用有明显差别，其中枫香树叶水煎液抗菌作用最好，对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、福氏志贺氏菌、伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度分别为0.5，1，0.5，0.5，0.25 g/ml。结论 枫香树叶对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、福氏志贺氏菌、伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌有较好的抗菌作用。

【关键词】  枫香树叶； 抗菌活性； 最低抑菌浓度

　　　　Abstract：ObjectiveTo research antimicrobial activity of Liquidambar formosana Hance's leaf.MethodsBy  methods of agar plate diffusions and tube continuous dilution, to measure antimicrobial activity and minimal inhibitory concentration(MIC) of  Liquidambar formosana Hance's leaf against pathogen and conditioned pathogen.Results(1) Liquidambar formosana Hance's leaf had not antimicrobial activity on E.coli, S.albicans. (2) Liquidambar formosana Hance's leaf had antimicrobial activity against S.aureus , S.epidermidis, S.flexneri, Salmonella Typhi, P.aeruginosa, the diameter of bacteriostatic circle was between 13 and 25 millimetre . The antimicrobial activity was significant different in different  extracted drug liquid, among which the antimicrobial activity of water extraction of Liquidambar formosana Hance's leaf was the best,the minimal inhibitory concentration against S.aureus S.epidermidis, S.flexneri, Salmonella Typhi, P.aeruginosa, is  0.5，1，0.5，0.5，0.25 g/ml,respectively.ConclusionLiquidambar formosana Hance's leaf has good antimicrobial activity against S.aureus, S.epidermidis, S.flexneri, Salmonella Typhi and P.aeruginosa.

　　Key words：Liquidambar formosana Hance's leaf；  Antimicrobial activity；  Minimal inhibitory concentration  
   
　　随着抗生素的广泛应用，耐药菌株逐年增多，目前金黄色葡萄球菌对青霉素G的耐药菌株高达90%以上［1］，尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA）已经成为医院内感染最常见的致病菌［2］。有些细菌甚至产生多重耐药，如致病性大肠埃希菌约40%的菌株对链霉素、氯霉素、四环素、青霉素等多种抗生素产生耐药性［3］；铜绿假单胞菌对许多抗生素具有天然或获得耐药性［4］，这给临床治疗带来极大的困难，如何有效防治细菌感染及控制细菌耐药性的产生与散播是一项长期、复杂、艰巨的任务，因而寻找和研制有效的抗菌药物非常必要。本文采用琼脂扩散法和试管连续稀释法进行体外抗菌实验及最低抑菌浓度（MIC）的测定，以探讨枫香树叶对常见致病菌和条件致病菌的体外抗菌活性。现报道如下。

　　1  材枓与方法

　　1.1  菌株来源　金黄色葡萄球菌（ATCC25923），白色葡萄球菌（ATCC12228），大肠埃希菌（ATCC25922），福氏志贺氏菌（ATCC27891），伤寒沙门氏菌（ATCC14028），铜绿假单胞菌（ATCC27853），购于北京生物制品鉴定所。白假丝酵母菌（ATCC14053），北大医院真菌菌种保藏中心（北京）提供。

　　1.2  枫香树叶　采自江西赣南山区，采药时间在5～6月之间。

　　1.3  药液的制备

　　1.3.1  50%乙醇煎液　取枫香树叶（生药）40 g，洗净，加适量50%乙醇溶液浸泡30 min，加热至100℃ 30 min，过滤。药渣再加适量50%乙醇溶液，加热100℃ 30 min，过滤。将两次滤液合并，用文火浓缩至10 ml（即每毫升药液含4 g生药）。

　　1.3.2  水煎液　用蒸馏水代替50%乙醇溶液按上述方法制备药液。

　　1.3.3  50%乙醇浸液　取枫香树叶（生药）40 g，洗净捣碎，与蒸馏水10 ml混匀浸泡2h，过滤，再经滤菌器滤过除菌，制成4 g/ml的生药。

　　1.3.4  水浸液　用蒸馏水代替50%乙醇溶液按上述方法制备药液。

　　1.4  方法　

　　1.4.1  菌液的制备　将金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、大肠埃希菌、福氏志贺氏菌、伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌接种于普通琼脂平板上，置37℃温箱中培养18 h，用无菌生理盐水配成每毫升相当于3亿的菌浓度（金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌配成每毫升相当于9亿的菌浓度）。将白假丝酵母菌接种于沙氏琼脂平板上，置37℃温箱中培养48 h，用无菌生理盐水配成1×108CFU/ml。

　　1.4.2  琼脂扩散法　用无菌棉签沾取菌液在普通琼脂平板上（白假丝酵母菌用沙氏琼脂平板）作均匀密集划线，待菌液干燥后，用外径5 mm的打孔器打孔，每孔加药液200 μl，平放在37℃温箱中培养24 h（白假丝酵母菌培养48 h）观察结果，测量抑菌圈直径。抑菌圈直径取两次实验结果的平均值。　1.4.3  试管连续稀释法［5］　根据抑菌实验的结果，选取敏感菌测定枫香树叶水煎液对其的最低抑菌浓度。取小号试管7支，编号。第1步每支管各加1 ml肉汤培养基。然后在第1管加1 ml药液，用吸管在第1管吹吸数次，使药液与肉汤培养基混匀，取出1 ml加于第2管，混均取出1 ml加于第3管，如此稀释至第6管弃去1 ml，第7管不加药液作为对照。第3步每管加菌液50 μl，混匀，置37℃温箱中培养24 h。然后从每管中取出一接种环接种于普通琼脂平板上，再继续培养24 h，观察结果。以无细菌生长的最高稀释浓度为该药液的最低抑菌浓度。

　　2  结果

　　2.1  枫香树叶的各种提取液对大肠埃希菌、白假丝酵母菌无抗菌作用。

　　2.2  枫香树叶的各种提取液对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、福氏志贺氏菌、伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌皆有抗菌作用，抑菌圈直径在13～25 mm之间。结果见表1。不同方法提取的药液的抗菌作用有明显差别，其中枫香树叶水煎液抗菌作用最好，50%乙醇煎液次之，50%乙醇浸液较差。

　　2.3  枫香树叶水煎液对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、福氏志贺氏菌、伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度（MIC）分别为0.5，1，0.5，0.5，0.25 g/ml。结果见表2。

　　表1  枫香树叶几种药液的抑菌圈直径（略）

　　表2  各试管枫香树叶水煎液的最低抑菌浓度（略）

　　－表示无细菌生长；＋表示有少量细菌生长；＋＋表示有较多细菌生长；＋＋＋表示有大量细菌生长

　　3  讨论
   
　　枫香树叶为金缕梅科植物枫香树Liquidambar formosana Hance的树叶［6，7］。《中药大辞典》记载枫香树叶有止血、治疔疮、治痢疾、治产后风和小儿脐风之功效［7］。民间有用枫香树叶治风湿，治中暑，治痢疾；文献［8］报道枫香树叶中含有人体必需10种无机元素并有治疗糖尿病和降血压的作用；但枫香树叶在抗菌作用方面国内外未见文献报道。本研究为枫香树叶作为抗菌新药的开发提供了可靠的实验依据。
   
　　实验结果表明，枫香树叶对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、福氏志贺氏菌、伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌均有明显的抗菌作用。不同方法提取的药液的抗菌作用有明显差异，其中枫香树叶水煎液抗菌作用最好，50%乙醇煎液次之，50%乙醇浸液较差，这可能与不同方法提取的药液的有效成分不同有关。由于中药粗提物中含有多种化学成分，成分与药理作用复杂，并且受多种因素的影响。本文只做了枫香树叶的粗提液，有关枫香树叶有效成分的提取与分析有待进一步研究。

【参考文献】
  　　［1］ 陆德源．医学微生物学，第5版［M］.北京：人民卫生出版社，2000：64.

　　［2］ Appelbaum PC．The emergence of vancomycin-intermediate and Vancomycin-resistant Staphylococcus attreusl［J］．Clin Microbiol Infect,2006,3(12)Suppl 1：16.

　　［3］ 闻玉梅.现代医学微生物学［M］.上海：上海医科大学出版社，1999：205.

　　［4］ 李红霞，李从荣，施金玲，等.医院铜绿假单胞菌感染体外耐药动态观察［J］.中华医院感染学杂志，2002，12（8）：621.

　　［5］ 李影林.临床医学检验手册［M］.吉林：吉林科学技术出版社,1987：606.

　　［6］ 陈德昌.现代实用本草（中册）［M］.北京：人民卫生出版社，2000：404.

　　［7］ 江苏新医学院．中药大辞典，上册［M］.上海：上海人民出版社，1977：1261.

　　［8］ 黄 澜，宋小平.海南枫香中人体必需无机元素含量测定与分析［J］.微量元素与健康研究，2001，18（1）：45.