魅优论文范文网

 找回密码
 立即注册
查看: 10867|回复: 0

[药学] 葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性研究

[复制链接]

2471

主题

2471

帖子

7385

积分

论坛元老

Rank: 8Rank: 8

积分
7385
发表于 2014-8-16 23:41:55 | 显示全部楼层 |阅读模式
    作者:师少飞,王兆梅, 郭祀远, 蓝嘉

【摘要】  目的研究各种葡聚糖硫酸酯(GS)超滤分级的体外和对大鼠的体内抗凝血活性。方法通过超滤分级的方法获得截留分子量不同的GS级分,并测其特性黏度[η];分别研究不同[η]的GS对大鼠凝血时间(CT)和全血复钙时间(RT)的时效性和量效性。结果各种[η]的GS均能显著延长CT和RT,且呈剂量依赖性;GS给药2 h时抗凝血活性达到最大;不同[η]的GS对CT和RT的延长作用不同,[η]为274.8 ml/g的GS的抗凝血活性最强。结论不同[η]GS均具有抗凝血活性,[η]为274.8 ml/g的GS抗凝血活性最强,与活性为175 IU/mg的低分子量肝素相当。

【关键词】  抗凝血; 葡聚糖硫酸酯; 特性黏度


  Anticoagulating Effect of Glucosan Sulfates with Different Intrinsic Viscosity

  Abstract:ObjectiveTo assess the anticoagulative activity of glucosan sulfate with different intrinsic viscosity in vivo and in vitro.MethodsGlucosan sulfates with different intrinsic viscosity were obtained by multiple ultra-filtration of glucosan sulfate raw material and their intrinsic viscosities were measured. Coagulation time (CT) and recalcification time (RT) were measured using a test tube method.ResultsCT and RT increased by the anticoagulation of fractioned glucosan sulfates, and they showed a significant dose-dependent relationship. The anticoagulation effect was maximum after 2 h of administration. The CT and RT were different with different fractions of glucosan sulfates. The anticoagulation of the glucosan sulfate with intrinsic viscosity of 274.8 ml/g was the highest.ConclusionThe anticoagulation can be enhanced significantly by the glucosan sulfate with different intrinsic viscosity. The higher the intrinsic viscosity was, the higher the effect of anticoagulant activity was. The anticoagulant activity of the glucosan sulfate fraction with an intrinsic viscosity of 274.8 ml/g was the same as 175 IU/mg of low molecular weight heparin.

  Key words:Anticoagulate;  Glucosan sulfates;  Intrinsic viscosity

    抗凝(血)剂在临床上用于抗凝治疗脑血管内凝血综合征、深度静脉栓塞以及预防心肺系统凝血的发生等,也是活血化淤药物的重要组成部分[1,2]。在体外,抗凝剂用于生物相容性医用材料领域和血管美容化妆品领域[3],是值得广泛开发的多功能产品。

    目前,临床上常用的抗凝剂是肝素,不同来源的肝素存在着结构和活性不稳定、易于携带多种危害人体健康的动物致病菌等不足。因此,开发安全、稳定的肝素替代品正引起广泛关注。硫酸酯多糖是一类具有抗凝血活性的物质,GS是葡聚糖经硫酸酯化修饰得到的半合成硫酸酯多糖,前期研究发现GS在体外具有突出的抗凝血作用[3,4]。本文在此基础上,进一步研究其在动物体内的抗凝血活性。

  1  材料与方法

  1.1  材料

  SD大鼠,160~190 g,雌雄各半,由中山大学医学院动物部提供;葡聚糖硫酸酯原料,自制;低分子量肝素(Low Molecular Weight Heparin, LMWH),山东省齐鲁制药厂生产,抗凝效价为175 IU/mg。

    杯式超滤器由聚醚砜超滤膜 (中科院膜研究所)、压缩氮气瓶及联接管道配件组成。

  1.2  葡聚糖硫酸酯的超滤分级及表征

  1.2.1  超滤分级采用截留分子量分别为4K,10K和50K的聚醚砜膜对GS原料进行二级超滤分级,得到4个级分,分别用F1,F2,F3和F4表示。

  1.2.2  [η]测定以毛细管黏度计,采用逐步稀释法[5]。

  1.3  大鼠凝血时间(CT)和全血复钙时间(RT)的测定

  1.3.1  CT测定大鼠给药一定时间后,以复方噻胺酮(10 ml/kg) 肌肉注射麻醉,从心脏取血1.0 ml于塑料试管中, 1 min后每隔10 s缓慢倾斜试管1次,记录倾斜试管时液面不动(纤维蛋白形成)时间,即为CT。

  1.3.2  RT测定大鼠腹腔动脉采血0.9 ml,加入预先盛有0.1 ml 3.8%枸橼酸钠的试管中,并在每支试管中加入待测样品0.01 ml,37℃水浴中孵育1 min,每支试管中再加入0.1 ml 0.01 mol/L的CaCl2,混匀后开始计时,记录倾斜试管时液面不动时间,即为RT[6,7]。

  1.4  统计学处理结果以±s表示,组间比较采用t检验,P< 0.05,认为有显著性差异。  2  结果

  2.1  GS的超滤分级GS原料经过截留分子量为4 000,10 000,50 000三级超滤分级,得到4个GS级分,分别用F1,F2,F3,F4表示,其特性黏度分别为1.1,46.3,71.2,274.8 ml/g。结果见表1。表1  GS的超滤分级结果(略)

  2.2  GS抗凝血作用的时-效关系GS给药1 h后,凝血指标CT值与对照组(0 h)相比均明显增大;以后,随着给药时间延长至1.5 h,CT值进一步提高。在给药后2.0 h,CT值达到最大。给药后2.5 h,CT值开始降低,3.0 h时,CT值更低。表明GS经皮下给药,2 h后药效达到最大,以下研究中均以给药2 h后采血测定。见表2。表2  GS作用时间对大鼠CT值的影响(略)

  2.3  GS抗凝血作用的量-效关系各GS级分的浓度均为0.6 g/L(相当于0.6mg/kg)时,即可显著延长大鼠的凝血时间CT和RT,经统计分析,各浓度实验组所对应的CT值和RT值与空白对照组之间均存在显著性差异,表明GS具有突出的抗凝血活性。且随着GS级分浓度的提高,其所对应的凝血指标值进一步增大,说明GS的抗凝血活性具有显著的剂量依赖效应,在本实验浓度范围内,增加GS的浓度,可显著提高其抗凝血作用。结果见表3~4。表3  GS剂量对大鼠CT 值的影响(略)表4  GS剂量对RT值的影响(略)

  2.4  [η]对GS抗凝血活性的影响对照组(0 h)时,4个[η]样品的CT无显著差异,给药1 h,F4与F1开始有明显差异,到2 h,4个样品CT值均达到最大,而且它们之间差异显著,F4的CT值最大,说明其抗凝血效果最好。结果见表2。

    从表3可看出,4个样在给药量0.6 g/L时,F4与F1的CT值差异开始显著,随着浓度的增加,这种差异越来越明显,当浓度为0.9 g/L时,4个级分之间的CT值差异都开始明显,且随着[η]增大,其凝血效果越明显,说明在相同浓度下,F4的凝血时间最大。从表4可知,在给药0.6 g/L时,4个样品之间的RT差异显著。表明F4的在各种实验浓度下RT均高于其它[η]的样品。综合以上分析,在实验范围内,GS的[η]越高,抗凝血活性越强。

  2.5  与未分级GS及LMWH的比较GS与LMWH间比较中可以看出,在0.6 g/L浓度下,4个级分所对应的CT均低于LMWH,但在浓度为0.9 g/L时,F4与LMWH的RT统计差异不显著,说明[η]大的GS在较高浓度下抗凝血效果与LMWH相当。对各级分与未分级GS间进行比较,在0.6 g/L浓度下,各GS级分所对应的CT与未分级GS之间不存在显著性差异;F3和F4所对应的RT值要明显高于F5。当浓度为0.9 g/L时,F4的CT也显著高于F5,F3和F4的RT要高于F5。这说明F4的抗凝血效果明显高于未分级GS。结果见表5。表5  与其它抗凝血药物的比较(略)

  3  讨论

    GS是葡聚糖C6和C2位上的羟基被硫酸酯基取代后的产物,是一种硫酸酯多糖。本文实验结果表明,GS具有突出的体外和体内抗凝血活性,这与其结构中的硫酸酯基聚阴离子与血液中带正电荷的凝血酶的结合以及葡聚糖主链所产生的模板效应有关[8]。与抗凝剂肝素一样,在给药2.0 h时CT值达到最大,且随着给药浓度的增大其CT和RT值均逐渐增大,说明GS的抗凝血效应具有显著的时效性和突出的量效性,这与其药代动力学有关。[η]是间接反映大分子几何尺寸的重要指标,在本实验范围内,GS的抗凝血活性随着[η]的增加而增大,这主要是因为[η]越大,分子中硫酸酯基负电荷量越多,与凝血酶的结合量越大,因此,造成血液中凝血酶失活程度增高。至于超出这一范围时进一步提高[η]是否能得到更好的抗凝血效果,这还需要综合考虑分子尺寸对其药物扩散的影响,值得进一步研究。

【参考文献】
    [1]Larsson R, Larm O, Olsson P. The search for thromboresistance using immobilized heparin[J]. Ann NY Acad Sci 1987,516:102.

  [2]Rhodes NP, Williams DF. Plasma recalcification as a measure of contact phase activation and heparinization efficacy after contact with biomaterials[J]. Biomaterials 1994,15:35.

  [3]王兆梅,李 琳,胡松青,等.两种硫酸化纤维素钠的结构和抗凝血活性研究[J]. 林产化学工业,2003,23(3):23.

  [4]Groth T, Wagenknecht W. Anticoagulant potential of regioselective derivatized cellulose[J]. Biomaterials, 2001, 22: 2719.

  [5]陈振聪,王兆梅,李 琳,等.生物活性纤维素硫酸酯的超滤分级研究[J].食品科学,2005, 26(11):47.

  [6]Fang Cao, Bingxiang Yuan. Experimental study about styptic actin of didanmingmu capsule in animals. Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine[J]. November 2004,22 (11):1084.

  [7]N. K. Mary, B. H. Babu and J. Padikkala. Antiatherogenic effect of Caps HT2, a herbal Ayurvedic medicine formulation[J]. Phytomedicine, 2003, 10(6-7): 474.

  [8]徐丽琴,尚德静,李庆伟,等.林蛙头多糖抗凝血活性的研究[J].中药新药与临床药理,2006,17(2):110.
回复

使用道具 举报

您需要登录后才可以回帖 登录 | 立即注册

本版积分规则

手机访问本页请
扫描左边二维码
         本网站声明
本网站所有内容为网友上传,若存在版权问题或是相关责任请联系站长!
站长电话:0898-66661599    站长联系QQ:7123767   
         站长微信:7123767
请扫描右边二维码
www.jtche.com

QQ|Archiver|手机版|小黑屋|魅优论文范文网 ( 琼ICP备10200388号-7 )

GMT+8, 2024-3-29 07:41 , Processed in 0.066085 second(s), 20 queries .

Powered by 校园招聘信息

© 2001-2020 魅优论文范文网校园招聘

快速回复 返回顶部 返回列表