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作者：龚先玲， 陈志红， 梁念慈
【摘要】 目的 分析测定半边旗中木犀草素和芹菜素的含量。方法采用ODSC18分析柱（25 mm×4.6 mm, 5 μm）；流动相为甲醇-0.4%的磷酸水溶液（1∶1）；检测波长345 nm，流速1 ml·min-1，柱温为25℃。结果木犀草素线性范围0.02～0.4 μg，r=0.999 9，平均回收率为96.39%(RSD=1.95%)；芹菜素线性范围0.02～0.4 μg，r=0.999 6，平均回收率为98.10%(RSD=0.96%)。结论 此法简便、准确、灵敏度高、重复性好，可以作为半边旗中两种黄酮的测定方法。
【关键词】 半边旗； 黄酮类化合物； 高效液相色谱法
Analysis and Determination of Flavonoids in Pteris semipinnata L. by HPLC
Abstract：ObjectiveTo analyze and determine the content of luteolin and apigenin in Pteris semipinnata L. by HPLC. MethodsThe HPLC system consisted of ODS-C18 column（25 mm×4.6 mm, 5 μm）, methanol : 0.4% sodium mixture as a mobile phase, detection wavelength at 345nm, 1 ml·min-1 of flow rate and column temperature at 25℃.ResultsThe linear range of luteolin and apigenin were 0.02～0.4 μg，r=0.999 9 and 0.02～0.4 μg，r=0.999 6 respectively，the recovery were 96.39%(RSD=1.95%，n=5) and 98.10%(RSD=0.96%，n=5)respectively.ConclusionThe method is simple, accurate, sensitive and reproducible. This method can be used for the quantitative determination of flavonoids in Pteris semipinnata L.
Key words：Pteris semipinnata L.; Flavonoids; HPLC
半边旗Pteris semipinnata L.为凤尾蕨科凤尾蕨属植物，广泛分布于四川及长江以南各省区，味苦、辛，性凉，具疏散风寒、化湿消肿、清热解毒等功效［1］。半边旗全草含黄酮类化合物［1，2］，傅玉萍等［3］检测了半边旗中总黄酮的含量，黄酮类化合物具有抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗病毒等作用［4］。为了进一步明确半边旗中黄酮类化学成分，本文采用高效液相色谱法分析测定了半边旗中木犀草素和芹菜素的含量。
1 仪器与试药
1.1 仪器美国惠普公司HP1100高效液相色谱仪；瑞士梅特勒公司AE240型电子分析天平。
1.2 试药黄酮标准品：木犀草素(luteolin；5,7,3',4'TETRAhydroxyflavone)、芹菜素(apigenin；5,7,4'trihydroxyflavone)，由天津尖峰公司提供（含量大于98%），甲醇为一级色谱纯，其它试剂均为分析纯；半边旗样品200205采于广州市郊，由广东海洋大学扬燕君副教授鉴定。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱为ODS C18分析柱（25 mm×4.6 mm, 5 μm）；流动相为甲醇-0.4%的磷酸水溶液（1∶1）；DAD检测器，检测波长345nm，流速1 ml·min-1，柱温为25℃。
2.2 供试品溶液的制备半边旗药材经过粉碎，过40目筛，称取该粉末约2.0 g，加20 ml甲醇，80℃下水浴加热回流2次，2 h/次。过滤，合并滤液，移入25 ml容量瓶中，定容，取该溶液少量用0.45 μm的微孔滤膜过滤，作为供试品溶液，备用。
2.3 对照品溶液的制备
称取木犀草素对照品2.50 mg，加甲醇定容至25 ml，作为储备液。 称取芹菜素对照品2.50 mg，加甲醇定容至25 ml，作为储备液。取两种储备液各15ml，加甲醇45 ml，制成木犀草素、芹菜素浓度均为0.02 μg·μl -1的对照品混合液，作为对照品溶液。 2.4 线性关系考察
精密吸取对照品溶液1，2.5，5，10，20 μl依次进样，按照上述色谱条件测定峰面积，木犀草素的峰面积分别为68.30，168.95，331.70，698.26，1415.26；芹菜素的峰面积分别为74.91，161.53，346.67，743.72，1509.54。以峰面积(Y)和质量（X）进行回归。求得回归方程见表1。表1 回归方程与线性范围（略）
2.5 精密度实验精密吸取木犀草素和芹菜素分别为0.02 μg·μl-1的对照品溶液10 μl，重复进样5次，对照品木犀草素峰面积的平均值为699.53，RSD=0.86%，芹菜素峰面积的平均值为742.83，RSD=1.75%。
2.6 稳定性实验取样品供试液分别在0，2，4，6，8 h测定，结果表明在测定条件下，于8 h内测定结果稳定，木犀草素和芹菜素RSD分别为2.50%，2.74%。
2.7 重现性实验按样品测定法测定，对同一批半边旗样品测定5次，木犀草素和芹菜素平均含量分别为0.240 8，0.211 6 mg·g-1，RSD分别为2.20%，2.46%。
2.8 加样回收率实验精密称取已知含量的半边旗样品，再精密加入浓度均为0.02 μg·μl-1木犀草素和芹菜素对照品溶液11 ml，按供试品溶液制备方法制备，按样品测定法测定，计算回收率。结果见表2～3。表2 木犀草素回收率实验结果 （略）表 3 芹菜素回收率实验结果 （略）
2.9 样品测定分别取上述木犀草素、芹菜素和对照品溶液10 μl，样品溶液10 μl注入高效液相色谱仪，按2.1项色谱条件测定，木犀草素标准品的色谱图见图1，芹菜素标准品的色谱图见图2，对照品溶液的色谱图见图3，样品溶液的色谱图见图4。3批样品木犀草素和芹菜素含量结果见表4。表4 3批样品的测定结果（略）
3 讨论
3.1 木犀草素和芹菜素在340～360 nm之间有较大吸收峰，但由于木犀草素在350 nm处吸收峰达最大，芹菜素在340 nm处吸收峰达最大，综合考虑，选择345 nm作为紫外检测波长。
3.2 本法同时测定半边旗中的木犀草素和芹菜素含量，简便、准确、灵敏度高、重复性好，可以作为半边旗中两种黄酮的测定方法。
【参考文献】
［1］丁恒山. 中国药用孢子植物学［M］. 上海：上海科技出版社，1982：104.
［2］徐国钧，何宏贤，徐珞珊，等.中国药材学，下册［M］. 北京：中国医药科技出版社，1996：1337.
［3］傅玉萍，苟占平，胡菊英，等. 分光光度计测定不同时期半边旗总黄酮含量［J］. 时珍国医国药，2001，12（12）：1080.
［4］ 裴凌鹏，惠伯棣，金宗濂，等. 黄酮类化合物的生理活性及其制备技术研究进展［J］. 食品科技，2004，25（2）：203. |
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发表于 2014-8-16 23:38:11
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