高效液相色谱法测定筋骨痛消丸中丹参酮ⅡA的含量

amy54321 · 发表于 2014-8-16 23:37:14

【摘要】  目的建立筋骨痛消丸中丹参酮ⅡA的高效液相色谱测定方法。方法用二氯甲烷甲醇（4∶1）提取样品，ODSC18色谱柱，甲醇水（80∶20）为流动相，流速0.8 ml/min，检测波长270 nm，外标法定量分析。结果分离度1.8，RSD=1.59%，平均回收率104.6%。结论该法分离度、精密度及稳定性好，可作为筋骨消痛丸的质量控制方法。

【关键词】  筋骨痛消丸；丹参酮ⅡA；高效液相色谱法

　　HPLC Determination of Tanshinone ⅡA in Jingutongxiao Pills

　　Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of thanshinone ⅡA in Jingutongxiao Pills. Methods Chloroform-methanol (4∶1) was used as the solvent to prepare the samples. ODS-C18 was used as stationary phase. Methanol-water (80∶20) was used as the fluid phase. The flow rate was 0.8 ml/min. The detection wavelength was 270 nm. Quantitatively analytic method was external standard means. Results The resolution was 1.8, RSD was 1.59%. The average recovery was 104.6%. Conclusion The results showed the method has good resolution precision and accuracy. The method can be used for the quality control of Jingutongxiao Pills.

　　Key words：Jingutongxiao Pills;  Thanshinone ⅡA;  HPLC

筋骨痛消丸是国家三类中药，由丹参、鸡血藤、香附、桂枝、白芍、川牛膝等组成，具有活血行气、温经通络、消肿止痛的功能，主治骨质增生引起的关节疼痛、肿胀、活动受限等症。筋骨痛消丸质量标准规定用薄层扫描法测定丹参ⅡA酮含量，由于薄层扫描法的定量精度较低,稳定性不高，不利于产品的生产和质量控制。为此，本文用高效液相色谱技术，建立了筋骨痛消丸中丹参酮ⅡA的HPLC快速测定法，以提高产品质控精度，保证产品生产和质量的稳定性。

　　1  仪器与试剂

　　1.1  仪器

　　Waters 510 高效液相色谱泵，Waters486 检测器，U6K 进样器，Baseline 810 色谱工作站。

　　1.2  试剂

　　丹参酮ⅡA标准对照品为中国药物生物制品鉴定所生产，筋骨痛消丸为河南省洛正制药厂产品［（97）卫药准字Z106号］，甲醇（色谱纯），重蒸水，二氯甲烷（分析醇）。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件

　　高效液相色谱柱Zorbax，ODS-C18 (4.6 mm × 250 mm, 5 μm）, 美国杜邦公司；流动相为甲醇-水（80：20）；流速 0.8 ml/min；检测波长 270 nm，灵敏度 0.05AUFS，柱温为室温。

　　2.2 供试液制备

　　取筋骨痛消丸样品及阴性对照样品适量研成细粉，精确称取细粉1.20 g 置于25 ml离心管中，加 10 ml 二氯甲烷-甲醇（4∶1）混合溶剂，超声提取 30 min，离心取上清，残渣重复提取两次，合并3次上清液，水浴回收溶剂至干，残留物用甲醇溶解并定容至 25 ml，经0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液为供试液。

　　2.3 柱效与分离度

　　用标准对照品溶液测得色谱柱理论塔板数为 12840，样品中丹参酮ⅡA峰与邻峰的分离度为 1.8，阴性对照样品在目标峰位置无吸收峰干扰。　　2.4  线性关系与标准曲线

　　称取丹参酮ⅡA标准品 10.00 mg，用甲醇溶解，定容至 10 ml为1.00 mg/ml的标准贮液。分别吸取一定量标准贮液，稀释至浓度为 1～800 μg/ml的系列标准溶液。进样10 μl，测定目标峰积分面积，以色谱峰积分面积为纵坐标，以标准浓度为横坐标作图，结果在 10～400 μg/ml 浓度范围内，色谱峰积分面积与进样浓度线性关系良好，线性回归方程为 Y=1.011 64×108X-1.15×106，相关系数 r=0.999 6。

　　2.5 回收率测定

　　取已知丹参酮ⅡA含量的筋骨痛消丸样品细粉约 1.00 g，精密称量 5 份，每份精密加入定量的丹参酮ⅡA标准对照品，混合后按样品处理方法处理，进样 10 μl，测定目标峰面积，用标准曲线计算样品中丹参酮 ⅡA的含量，计算结果样品中丹参酮ⅡA回收率为 104.6%。

　　2.6 精密度与重复性

　　用标准对照品溶液连续进样 10 次，测得精密度RSD=1.12%，对同一样品细粉同时取 6 个样，按上述方法提取、分析，重复性 RSD=1.59%。

　　2.7  丹参酮ⅡA的热稳定性分析

　　样品供试液制备后，分别在室温常规条件下和冷藏避光条件下保存10 min，4，8，12，24 h和48 h，分别测定各放置时间样品中的丹参酮ⅡA含量，测定结果表明，供试液在室温常规条件下保存8 h内，或冷藏避光条件下保存24 h内测定，不会影响分析结果。

　　2.8  样品含量测定

　　分别取3个批号的筋骨痛消丸样品，按上述方法处理制备供试液，测定样品中丹参酮ⅡA含量，3批样品中的含量分别为 0.035 4%，0.033 9%，0.034 8%。

　　3  讨论

参考相关文献，对比研究了甲醇、二氯甲烷、二氯甲烷-甲醇不同比例的溶剂对筋骨痛消丸中丹参酮ⅡA的提取效果，结果用二氯甲烷-甲醇（4∶1）混合溶剂对筋骨痛消丸中丹参酮ⅡA的提取较完全。本方法有较好的分离度和精密度。样品供试液制备后，在室温下8 h内或在闭光的条件下48 h内有较好的稳定性，可以作为产品的质量控制指标。

【参考文献】
  　　［1］于彤，吴秀清.高效液相色谱法测定复方丹参颗粒中丹参酮ⅡA的含量［J］.中药材，1998，21（8）：421.

　　［2］谭生建，王文明，胡文祥，等.HPLC法测定通脉冲剂中丹参ⅡA的含量的研究［J］.中国中药杂志，1999，24（9）：545.

　　［3］杨毅恒，张晓乐，王淑庆，等.乳结消散片中丹参酮ⅡA的含量测定［J］.中国药学杂志，2001,36（1）：56.

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[药学] 高效液相色谱法测定筋骨痛消丸中丹参酮ⅡA的含量