叶下珠有效部位总提取物一般药理作用研究

amy54321 · 发表于 2014-8-16 23:05:09

作者：温志坚，周永禄，曹毓，彭龙玲

【摘要】  目的观察叶下珠有效部位总提取物1次灌胃给药对中枢神经系统、心血管系统、呼吸系统的影响。方法叶下珠有效部位总提取物500，250，125 mg·kg-1次灌胃给药，观察该品对小鼠戊巴比妥钠睡眠时间、戊巴比妥钠睡眠阈下剂量以及1次灌胃600，150 mg·kg-1对小鼠自主活动的影响；叶下珠有效部位总提取物47，470 mg·kg-1十二指肠给药，观察对杂种狗血压、呼吸、心率、心电图的影响。结果对小鼠戊巴比妥钠睡眠时间、小鼠戊巴比妥钠睡眠阈下剂量、小鼠自主活动均无影响。对狗血压、呼吸、心率、心电图（PR间期、Q-T间期、T波）均无影响。结论叶下珠有效部位总提取物在所用剂量范围内，未出现对中枢神经系统、心血管系统、呼吸系统有明显影响。
　

【关键词】  叶下珠有效部位；药理作用

　　Abstract：ObjectiveTo observe the effects of total extracts of Yexiazhu on nervous system,cardiovascular system,and respiratory system in mice and dogs.MethodsThe times of freedom movement in mice ,the effect on the hypnotic dosage and subthreshold hypnotic dosage of Pentobarbital Sodium in mice,the blood pressure, heart rates in dogs were observed.ResultsThe blood pressure,heart beat rate,heart rhythm,respiratory rate,depth of respiration ,freedom movement,hypnotic dosage and subthreshold hypnotic dosage of pentobarbital Sodium in animals had no obvious difference after given total extracts of Yexiazhu.ConclusionTotal extracts of Yexiazhu in effective dose have no obvious influence on nervous system in mice,respiratory system and cardiovascular system in dogs.

　　Key words：Extracts of Yexiazhu;  Pharmacology

叶下珠Phyllanthus urinaria L.为大戟科Euphorbiaceae叶下珠属PhyllathusL.的全草，自印度学者Thyagarajan 1988年首次报道苦味叶下珠Phyllanthus amarus L.治疗乙型肝炎病毒携带者有良效以来，引发了国内外学者广泛、深入、持久的开发研究；本课题组采用大孔树脂提取工艺制备的叶下珠Phyllanthus urinaria L.）有效部位总提取物及其制剂（叶下珠胶囊，下文均统称叶下珠），用于治疗鸭乙肝［1］和临床预试［2］均获良效。目前叶下珠研究领域已拓展到抗肿瘤、抗单纯疱疹病毒、抗艾滋病毒、抗菌、溶栓、镇痛等领域；但其毒理学的研究报道却极少。为了更深入研究叶下珠的药理作用，为临床应用提供安全参考，拟将叶下珠有效部位总提取物一般药理、毒理研究结果作较系统的报道。

　　1  叶下珠对中枢神经系统的作用［3］

　　1.1  器材受试药物：叶下珠有效部位总提取物（下称叶下珠）每克相当原生药34 g；下文均以叶下珠有效部位总提取物重量计算。批号：96237，由四川中药研究所药化室提供。

　　1.2  动物昆明种远交系小鼠，一级标准，合格证为24301035；四川省中药研究所实验动物室提供。

阳性对照药：速效枣仁安神胶囊内容物，重庆中药厂生产，批号：951206-4临用时蒸馏水配制5 mg/ml。戊巴比妥钠，Serva进口分装，Serva进口分装，上海化学试剂采购供应站，批号95-01-03。

　　1.3  仪器智能四箱式生物自发活动测定仪，重庆大学生物工程中心研制。

　　1.4  方法与结果

　　1.4.1  叶下珠对戊巴比妥钠睡眠时间的影响取体重18～22 g昆明小鼠50只，雄性，每组10只，共5组，分别为正常对照组（灌服生理盐水），速效枣仁安神胶囊100 mg/kg，叶下珠大、中、小剂量（500，250，125 mg/kg）；各组动物灌胃给药1 h后腹腔注射戊巴比妥钠50 mg/kg；记录灌胃后动物行为，以及腹腔注射戊巴比妥钠后，翻正反射消失和恢复的时间，计算各动物睡眠时间；数据按t检验统计处理结果见表1：药后观察动物行为未见异常。（给药后无催眠、镇静，无体位变化；姿势、步态均正常，无肌颤、流涎、眼球震颤等改变）。表1  叶下珠对小鼠戊巴比妥钠睡眠时间影响（略）

结果表明叶下珠对小鼠戊巴比妥钠睡眠时间无明显影响；阳性对照组速效枣仁安神胶囊100 mg/kg可明显延长小鼠戊巴比妥钠的睡眠时间。

　　1.4.2  叶下珠对戊巴比妥钠阈下催眠剂量的影响取体重18～22 g昆明种小鼠50只，雄性，随机分成5组，每组10只，分组及剂量见表2。药物组按0.2 ml/10 g灌胃，正常对照组灌胃等体积生理盐水。小鼠于给药后30 min分别腹腔注射阈下催眠剂量的戊巴比妥钠（25 mg/kg,0.1 ml/10 g），观察注射戊巴比妥钠15 min后各组翻正反射消失1 min以上的动物数；χ2值测定给药组与对照组的差异。结果见表2。表2  叶下珠对戊巴比妥钠阈下催眠剂量的影响（略）

结果表明：叶下珠各剂量与正常对照组无显著性差异；速效枣仁安神胶囊和戊巴比妥钠有协同作用，说明速效枣仁安神胶囊有镇静作用。

　　1.4.3  叶下珠对小鼠自发活动的影响仪器：智能四箱式生物自发活动测定仪，重庆大学生物工程中心研制。

受试药物、阳性对照药、实验动物来源均同上。
取体重为18～22 g昆明小鼠40只，分成4组，每组10只，雌雄各半；分别设叶下珠大、小剂量组（600，150 mg/kg）、速效枣仁安神胶囊75 mg/kg和正常对照组；实验分10批进行，每批分别取各组动物1只，按表3剂量灌胃1次，正常对照组灌胃等体积蒸馏水，给药1 h后分别置智能四箱式生物自发活动测定仪中，测定20 min动物的总位移数，结果见表3。实验结果进行t检验。表3  叶下珠对小鼠自发活动的影响（略）

结果表明叶下珠大、小剂量对小鼠自发活动均无明显影响；速效枣仁安神胶囊可明显减少小鼠总位移数。即抑制小鼠自发活动。

综上所述，叶下珠对中枢神经未产生明显的抑制或兴奋作用。而速效枣仁安神胶囊有明显安神、镇静作用。　　2  叶下珠对狗血压、呼吸、心率、心电图的影响［4］

　　2.1  材料

　　2.1.1  受试药物叶下珠有效部位总提取物，每克相当原生药34 g。本所药化室供。

　　2.1.2  动物杂种狗，体重10 kg左右，中国人民解放军第三军医大实验动物室提供，雌雄兼有。

　　2.1.3  仪器日本光电RM-6000 kg型多导生理记录仪。

　　2.1.4  试剂戊巴比妥钠，Serva进口分装，上海化学试剂采购供应站，批号95-01-03。

　　2.2  方法与结果动物于实验前驱线虫，两周后起用，基本方法按文献［4］，按体重腹腔注射戊巴比妥钠33 mg/kg麻醉，麻醉后仰位固定于解剖台上，分离左侧总动脉，插管连接日本RM-6000型多导生理记录仪上描记血压、呼吸、Ⅱ导联心电图。剑突下切一小口约3 cm，找出十二指肠行外科插管并固定，作给药用通道。手术记录血压、呼吸、心率、心电图30 min平稳后，十二指肠给药。按两个剂量组（47，470 mg/kg）给药，两剂量分别相当临床剂量（10 mg/kg）4.7，47倍。给药后隔5，15，30 min描记，共记录13次。结果如表4～6。表4  叶下珠对狗心率、呼吸、血压的影响(略)表5  叶下珠对狗心率、呼吸、血压的影响(略) 表6  叶下珠对狗心电图的影响（十二指肠1次给药结果）(略)

　　结果显示：叶下珠47 ，470 mg/kg(临床剂量4.7，47倍)对狗戊巴比妥钠麻醉条件下十二指肠给药，用MR-6000型多导生理记录仪连续4 h记录给药前后的呼吸、血压、心率、心电图，未发现异常。

　　3讨论

本文按中药5类新药开发研究的一般药理研究指导原则进行研究，按该原则，新药一般药理研究是指新药主要药效作用以外广泛的药理作用研究（重点观察中枢神经系统、心血管系统、呼吸系统）；以了解该品更全面的药理作用，为全面开展毒理研究作准备。结果显示：叶下珠有效部位总提取物500，250，125 mg/kg（均在药效学有效剂量范围之内）对戊巴比妥钠睡眠时间、对戊巴妥钠阈下催眠剂量、小鼠的自发活动均无影响。说明本品对中枢系统无兴奋或抑制作用。这有利于使用药品的患者正常工作与生活；结果还显示，对戊巴比妥钠麻醉状态下的犬，施用外科插管作十二指肠给药，八导生理记录仪连续4 h记录心率、心电图、血压、呼吸频率，结果表明，47，470 mg/kg（分别相当于临床预试剂量的4.7倍和47倍）对正常麻醉状态动物的心率、心电、血压、呼吸频率无影响；有报道认为苦味叶下珠全草具有利尿、降压作用，能显著降低患者收缩压［5，8］。苦味叶下珠有效成分叶下珠素、叶下珠次素、珠子草素是新发现的一类蝴蝶肽类内皮素-Ⅰ拮抗剂，能选择性抑制内皮素-Ⅰ与A型受体结合，从而达到降压作用［6，8］；还有报道［7，8］认为叶下珠属植物活性成分鞣花酸、老鹳草素（geraniin）、没食子酸、柯里拉京均能抑制血管紧张素转化酶（ACER）活性，从而抑制血管紧张素-Ⅰ转化为血管紧张素-2。可能是采用的叶下珠（Phyllanthus urinaria L）有效部位总提取物成分较多，可能存在互相互干扰的成分，或者我们是采用整体动物麻醉状态下显示其作用有异。Srividya. N报道的是Phyyllar-thus urinaria L全草，观察对象又是人，而且用药时间为10 d；而Hussain R A和Ueno H应用的是单一成分。所以与国外学者结果有异。为深入研究，有必要将有效成分分离纯化，作进一步药理研究。

【参考文献】
  　　［1］陈压西，郭树华，温志坚，等.叶下珠有效部位抗鸭乙型肝炎病毒及体外抗HBV活性的研究［J］.中药药理与临床，1999，15（6）：16.

　　［2］张建军，盛国光，张赤志.叶下珠胶囊治疗慢性乙型肝炎的临床研究［J］.中西医结合肝病杂志，2002，12（6）：326.

　　［3］李仪奎，王钦茂.中药药理实验方法学［M］.上海：上海科学技术出版社，1991：327.

　　［4］徐叔云，卡如濂，陈修.药理实验方法学，第2版［M］.北京：人民卫生出版社，1991：804.

　　［5］Srividya,Nct al.Indlan J Exp Biol.1995，33（11）：861.

　　［6］Hussain R A ctal.J Nat Prod.1995:58(10):1515.
［7］Ueno H ct al.J Nat Prod.1988,51(2):357.

　　［8］任进余，秦存林.苦味叶下珠、叶下珠的药理作用综述［J］.国外医学中医中药分册，1999，21（2）：3.

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