高效液相色谱法测定益气养阴降糖丸中葛根素的含量

amy54321 · 发表于 2014-8-16 22:57:27

作者：颜素琴，宋晓琳，李祥勇

【摘要】  目的建立益气养阴降糖丸中葛根素的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法（HPLC）法，检测波长：250 nm，流动相：甲醇0.1%枸橼酸溶液(25∶75), 流速：1.0 ml/min 。结果葛根素浓度在10.0～90.0 μg/ml范围内线性关系良好（r=0.999 6），加样回收率为99.5%（n=3），RSD为1.2%。结论此方法操作简便，结果准确，可用于益气养阴降糖丸中葛根素的含量测定。

【关键词】  高效液相色谱法；葛根素；益气养阴降糖丸

　　Determination of Puerarin Content in Jiangtang Pill for Invigorating Qi Nourishing Yin by HPLC Method

　　Abstract：ObjectiveTo develop a method to determine the content of puerarin in Jiangtang pill for invigorating Qi, nourishing Yin.MethodsHigh Performance Liquid Chromatography (HPLC), with detection wavelength of 250 nm, the mobile phase consists of methanol and 0.1% citric acid (25∶75), at flow rate∶1.0 ml/min.ResultsThe linear range of puerarin was 10.0～90.0 μg/ml(r=0.999 6). The recovery of sample was 99.5%(n=3) with RSD of 1.2%.ConclusionThis method is simple accurate, and can be used for the determination of puerarin content in Jiangtang pill for invigorating Qi, nourishing Yin.

　　Key words：HPLC method;  Puerarin;  Jiangtang pill for invigorating Qi

益气养阴降糖丸是我院研制的治疗糖尿病的中成药，由黄芪、葛根、桑寄生、生地、生水蛭等十多味中药组成，具有益气养阴、健脾运津、除烦止渴、补益肝肾的作用，临床疗效良好。为了更有效地控制制剂的质量，我们对其主要成分葛根素进行了含量测定，以期为该制剂的质量控制提供检测方法。

　　1  仪器与试药

日本岛津LC10ATVP高效液相色谱仪，SPD10AVP紫外检测器，赛多利斯BP211D电子天平，葛根素对照品（中国药品生物制品检定所01250107），甲醇为色谱纯，益气养阴降糖丸（自制）。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件

　　色谱柱为日本岛津Shimpeck VPODS 柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇0.1%枸橼酸溶液(25∶75), 流速1.0 ml/min，检测波长为250 nm，柱温为室温。

　　2.2  溶液的制备

　　2.2.1  对照品溶液的制备

　　精密称取葛根素对照品25 mg（60℃五氧化二磷减压干燥4 h）置50 ml量瓶中，加流动相溶解，并稀释至刻度，摇匀即得。

　　2.2.2  供试品溶液的制备

　　精密称取供试品4.0 g，研细，置50 ml量瓶中，用甲醇溶解，超声处理30 min，并稀释至刻度，离心，取上清液，用0.45 μm的微孔滤膜滤过，精密量取续滤液5 ml，置25 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀即得。

　　2.3  标准曲线的制备精密量取对照品溶液1.00，3.00，5.00，7.00，9.00 ml分别置于50 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，制得标准溶液系列，取10 μl注入液相色谱仪，测定峰面积，以对照品溶液浓度C为横坐标，峰面积A为纵坐标，进行线性回归分析，回归方程为：A=50 939 138C-10 496，r=0.999 6，线性范围10.0～90.0 μg/ml，最低检测限为100 μg/ml（S/N≥3）。　2.4  精密度实验

　　在上述色谱条件下，取50μg/ml的对照品溶液，重复进样6次，峰面积的RSD值为0.62%。结果表明仪器的精密度较好。

　　2.5  重复性实验

　　精密称取同一批号的样品5份，按照样品测定方法操作，测定含量，计算RSD为1.6%。

　　2.6  回收率实验

　　精密称取已知葛根素含量的样品3份，每份中分别加入精密称定的葛根素对照品，混匀，照供试品的测定方法，计算平均回收率为99.5%（n=3），RSD为1.2%。

　　2.7  样品的含量测定

　　取3个批号的样品，制成供试品溶液，分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10 μl注入液相色谱仪，依法测定，以外标法计算含量。结果见表1。表1  益气养阴降糖丸中葛根素的含量（略）
　　3  讨论

　　3.1  流动相的选择

　　本实验比较了甲醇-水，乙醇-水，甲醇-酸液系统对样品中葛根素保留时间、分离度的影响，结果发现采用甲醇-0.1%枸椽酸溶液（25∶75）的流动相色谱效果良好。

　　3.2  提取方法的比较

　　对于葛根素的提取，以往的文献有采用索氏提取器提取的［1］，有采用水浴加热回流提取的［2］，本实验采用甲醇为溶媒，采取超声振摇提取法提取，效果良好，方便快捷。

方法学验证显示，本实验所建立的方法简便、可靠，可作为该制剂质量控制的方法。

【参考文献】
  　　［1］贺云.高效薄层色谱双波长扫描法测定颈复康冲剂中葛根素的含量［J］.陕西师范大学学报，2000，28（2）：123.

　　［2］李守拙.颈复康冲剂中葛根素的含量测定［J］.中国中药杂志，1996,21(2)：101.

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[药学] 高效液相色谱法测定益气养阴降糖丸中葛根素的含量