芎附根痛消丸的质量控制

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   作者：张永恒，乔立新，卢乙众，丁毅

【摘要】  目的制订芎附根痛消丸的质量控制方法。方法采用显微鉴别及薄层鉴别方法对处方成分进行定性分析。结果质控方法切实可行，重现性好，分辨性高。结论处方设计合理，质控方法可靠，能够保证药品质量。

【关键词】  芎附根痛消丸； 质量控制； 显微鉴别； 薄层鉴别


    芎附根痛消丸是新乡医学院第一附属医院研制生产的中药浓缩丸，含川芎、当归、香附、赤芍等十多味药物，用于治疗腰腿或颈肩疼痛如刺，痛有定处，向肢体末端放射，伴麻木、活动受限、遇寒加重，腰椎间盘突出、坐骨神经痛见上述症候者。本药自应用于临床以来，以其显著确切的疗效［1］，深受广大腰椎间盘突出患者的青睐。为保障药品质量，保证临床疗效，保护患者安全，现将芎附根痛消丸的质量控制方法介绍如下。

　　1  仪器与试药

　　1.1  仪器

　　XSP-2C型生物显微镜，ZF-Ⅰ型三用紫外分析仪，TCQ-250型超声波清洗器，H.H.S11-2B型电热恒温水浴锅，102型电热恒温鼓风干燥箱，微量进样器，玻璃层析缸。

　　1.2  试药三七皂苷R1对照品（110745—200415，中国药品生物制品检定所提供），人参皂苷 Rg1对照品（0703—9914，中国药品生物制品检定所提供），芍药苷对照品（0736—200015，中国药品生物制品检定所提供），橙皮苷对照品（110721—200512，中国药品生物制品检定所提供），乌头碱对照品（110720-200410，中国药品生物制品检定所提供），川芎对照药材（0918-200004，中国药品生物制品检定所提供），当归对照药材（120927-200411，中国药品生物制品检定所提供），红花对照药材（907-9905，中国药品生物制品检定所提供），其他所用试药试剂均为分析纯。

　　2  方法与结果

　　2.1  性状本品为棕褐色至黑褐色的浓缩丸，气微香，味微苦。

　　2.2  鉴别

　　2.2.1  显微鉴别取本品研细，处理后置显微镜下观察：不规则碎块淡黄色，半透明，渗出油滴，加热后油滴熔化，显正方形草酸钙方晶（没药）；石细胞长方形或类方形，壁稍厚（草乌）；分泌细胞类圆形，含淡黄棕色至红棕色分泌物，其周围细胞作放射状排列（香附）。见图1。

　　2.2.2  薄层鉴别

　　2.2.2.1  川芎、当归取本品8g，研细，加乙醚20ml，超声处理15min，滤过药渣备用，滤液低温挥去乙醚，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取川芎及当归对照药材各0.3g,同法制成对照药材溶液；再取不含川芎、当归的模拟芎附根痛消丸8g,按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法实验［2］，吸取上述4种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯（9：1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照色谱无此斑点。见图2。

　　2.2.2.2  三七取2.2.1项下药渣，挥去乙醚，加甲醇40 ml,超声提取30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 ml使溶解，加水饱和的正丁醇萃取3次，20 ml/次，合并正丁醇液，用氨试液20 ml洗涤，弃去氨试液，再用正丁醇饱和的水洗至中性，正丁醇液水浴蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取三七皂苷R1对照品及人参皂苷Rg1对照品，分别加甲醇制成每毫升含量1 mg的溶液，作为对照品溶液；再取不含三七的模拟芎附根痛消丸8g,按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法实验［2］，吸取上述4种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇—醋酸乙酯—水（4∶1∶5）的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，立即于110℃加热至斑点显色清晰，自然光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照色谱无此斑点。见图3。

　　2.2.2.3  赤芍取芍药苷对照品，加甲醇制成每毫升含量1 mg的溶液，作为对照品溶液；另取不含赤芍的模拟芎附根痛消丸8 g,按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法试验［2］，吸取2.2.2项下供试品溶液、芍药苷对照品溶液及阴性对照溶液各3 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，立即于105℃加热至斑点显色清晰，自然光下检视,供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照色谱无此斑点。见图4。2.2.2.4  红花取本品8 g，研细，加水100 ml，置水浴中提取30 min，放冷，滤过，滤液用醋酸乙酯提取2次（20 ml,15 ml），合并醋酸乙酯液，用1%氢氧化钠溶液提取2次（20 ml,15 ml），合并碱水层，用稀盐酸调pH至5～6，用醋酸乙酯提取2次（20 ml,15 ml），合并醋酸乙酯液，用无水硫酸钠脱水后，水浴蒸干，残渣加醋酸乙酯1 ml使溶解，作为供试品溶液；另取红花对照药材1 g，加水50 ml，置水浴中提取2 h，放冷，滤过，按供试品溶液的制备方法，从“滤液用醋酸乙酯提取2次… …”起操作，制得对照药材溶液；另取不含红花的模拟芎附根痛消丸8 g,按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法试验［2］，吸取上述3种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯（5∶3）为展开剂，展开，取出，晾干，在氨蒸气中熏15 min,置紫外灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照色谱无此斑点。见图5。

　　2.2.2.5  枳实取本品12 g，研细，加甲醇30 ml，超声处理 20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液；另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液；另取不含枳实的模拟芎附根痛消丸12 g,按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法实验［2］，吸取供试品溶液及阴性对照溶液各2 μl，对照品溶液5 μl，分别点于同一含0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲醇-水（100∶17∶ 13）为展开剂，展开缸预平衡30 min，展开，展距约3 cm，取出，晾干，再以甲苯-醋酸乙酯-甲酸-水（20∶10∶1∶1）的上层溶液为展开剂，展开缸预平衡30 min，展开，展距约8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液,置紫外灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照色谱无此斑点。见图6。

　　2.3  检查

　　2.3.1  乌头碱检查取本品适量，研细，称取8.5 g，置锥形瓶中，加氨试液10 ml，拌匀，放置2h，加乙醚60 ml，超声处理15 min，滤过，滤液加盐酸溶液（4→100）振摇提取3次（20,15,15 ml），合并盐酸液，盐酸液加浓氨液调pH至9～10，加乙醚振摇提取3次，20 ml/次,合并乙醚液，挥干，残渣加无水乙醇1 ml使溶解，作为供试品溶液；另取乌头碱对照品，加无水乙醇制成每毫升含量1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法实验［2］，吸取上述两种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）—三氯甲烷—无水乙醇（2∶4∶3）为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏至斑点颜色清晰，自然光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显浅于对照品颜色的斑点或不出现斑点。见图7。

　　2.3.2  其他符合丸剂［2］项下有关各项规定。

　　3  讨论

　　3.1  显微鉴别前处理时，先将研细的粉末加水超声处理2～3 min,离心，取沉淀物处理后镜检，发现镜下视野比常规处理清晰，显微特征明显，易于辨认查找，省力省时，可能是超声处理后排除了丸剂中浸膏等物质的干扰。

　　3.2  在枳实的薄层色谱过程中，发现供试品色谱的斑点分离不明显，改用20 cm×10 cm薄层板，且展开缸预先平衡30 min，展开显色后斑点分离较好，斑点清晰，无干扰，效果较理想。

　　3.3  在乌头碱限量检查过程中，发现用碘蒸气熏显色后的斑点比喷稀碘化铋钾试液显色的斑点清晰，故选用碘熏显色。

　　3.4  本品应建立定量分析方法，测定主药含量，更好地控制药品质量，但由于条件所限，定量分析方法有待于进一步探讨和研究。



【参考文献】
  　　［1］王文彪，曾一林.手法治疗腰椎间盘突出症［J］.中国骨伤，2005，18（3）：139.

　　［2］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：附录Ⅵ B，ⅠA.