液质联用仪在鉴别保健食品中茶碱成分的应用

jz066520 · 发表于 2014-6-2 10:43:35

【摘要】建立保健食品中非法添加药物——茶碱成分定性定量的方法。该方法主要参数为：色谱柱为Agilent KromasilC18(150mmX4.6mm，5μm)，流动相为甲醇水(30：70)检测波长为270nm，流速为1ml·min-1(液相)流速为0.3ml·min-1(质谱);该方法对茶碱的平均回收率为99.52%，RSD为0.81%(n=5)。该方法简便，结果准确，专属性强，可用于保健食品中非法添加药品茶碱成分的测定和确定。

【关键词】高效液相色谱质谱联用法; 保健品; 茶碱

　高效液相色谱质谱联用法是将高分离能力、使用范围极广的液相色谱分离技术(包括高效毛细管电泳、毛细管高效液相色谱)与高灵敏、高专属的质谱技术结合起来，成为一种强有力、多用途的定性、定量分析工具。

　　本研究采用高效液相色谱质谱联用法，对保健品中非法添加药品茶碱进行定量和定性的测定。确证分子离子峰正模式下为181，负模式下为179。实验结果表明，本法简便、快速、专属性强，可用于茶碱定量和定性的测定。

　　1 仪器与试药

　　LC1200型高效液相色谱仪(安捷伦公司生产)，VWD型紫外检测器，Agilent化学工作站，6300质谱检测仪(安捷伦公司生产)，电喷雾离子化源(ESI源)，普利赛斯电子分析天平。茶碱对照品(批号：100121199903，中国药品生物制品检定所)，哮喘一次灵两批(×××市高科生物保健品有限公司出品，批号2008.8.3生产、200908025)，肺宝胶囊(×××生物保健品厂出品，批号080101)。甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件

　　色谱柱：Agilent KromasilC18(150mm×4.6mm，5μm);流动相：甲醇水(30：70);检测波长：270nm;流速：1ml·min-1;柱温：20℃。理论塔板数不低于2500;分离度大于1.5。

　　2.2 线性关系

　　精密称取茶碱对照品0.0255g，置于250ml量瓶中，加流动相适量超声溶解后，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为储备液。精密量取储备液用流动相溶液分别稀释制备浓度分别为1976ug/ml，988ug/ml, 494ug/ml, 197.6ug/ml, 102ug/ml, 51ug/ml, 25.5g/ml 系列标准溶液按上述色谱条件，取10μl进样，记录色谱图，以峰面积Y对对照品进样量(μg·ml-1)作线性回归。结果回归方程(n=7)为：　Y=0.0305X-2.341 г=1

　　线性范围为：25.5μg/ml-1976μg/ml

　　2.3 重复性实验

　　取同一批号样品3份，精密称定，按样品测定项下的方法，测定茶碱的含量，RSD为0.79%。

　　2.4 稳定性实验

　　取重复性实验中的第一份溶液，室温下在0、1、2、3、4小时测定，结果表明，本品的供试品溶液在室温4小时内基本稳定，RSD=0.67%，n=5。

　　2.5 精密度试验

　　取线性关系考察中茶碱浓度为197.6μg/ml的对照品溶液，重复进样5次，结果RSD为1.28%。

　　2.6 加样回收实验

　　精密称取已知含量的样品适量5份，分别精密加入茶碱对照品储备液1.00ml，加流动相稀释至刻度，照样品测定项下的方法测定，结果见表1。表1 回收率测定结果表(n=5)

　　2.7 样品中所含茶碱的质谱确证与含量的测定

　　精密称取茶碱对照品5mg，置于50ml量瓶中，加流动相适量超声溶解后，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为储备液。精密量取储备液用流动相溶液分别稀释制备浓度分别为1976ug/ml，988ug/ml, 494ug/ml, 197.6ug/ml, 102ug/ml, 51ug/ml, 25.5g/ml 系列标准溶液按上述色谱条件，取10μl进样，记录色谱图，制备标准工作曲线，建立拟合方程，计算相关系数(r值不小于0.99)。

　　取本品20粒，将内容物混匀研细后，精密称取约300mg，置于50ml容量瓶中，加流动相少许超声提取10分钟后，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，离心后，取上清液1ml于50ml量瓶中按上述色谱条件，取10μl进样液质联用分析，记录对照品与样品色谱图(图1)、正模式一级质谱、二级质谱图(图2)及负模式一级质谱、二级质谱图(图3)并与对照品质谱图谱比较(正模式一级质谱、二级质谱图见图4，负模式一级质谱、二级质谱图见图5)，确证含茶碱后，代入拟合方程计算，测得结果，结果见附图和表2。

　　3 讨论

　　样品前处理应注意的问题：因大多含未知成分，且成分复杂，对分析测定的影响及干扰时刻存在，因此检验中要特别注意，避免交叉污染。

　　质谱检测器比较灵敏，浓度不宜过高，浓度1-5ppm较好，离子阱不适合复杂样品中目标化合物定量分析，所以，用液相色谱定量，质谱确证。

　　本方法简便、快速、专属性强，为保证药品质量提供了一定的参考。表2 保健食品中茶碱的含量测定结果表(n=3)

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