二乙基亚硝胺(DENA)诱发SD大鼠肝癌变进程中T3、T4血清含量的变化研究

JZ041567

【摘  要】 目的  探讨大鼠肝脏癌变过程中，血清中甲状腺激素(T3 、T4)的变化及意义。方法  用DENA作诱癌剂，建立SD大鼠肝癌病变模型。从诱癌之日起，分别于14d、28d、56d、77d、105d、112d取血，用放射免疫法检测血清中T3、T4的含量，用SPSS软件对其结果进行统计分析。结果  T3、T4含量呈不同程度的先升后降的变化。结论  在DENA诱发大鼠肝脏癌变过程中，T3、T4含量呈现不同程度的先升高后降低趋势，提示T3、T4与肝癌的发生发展关系密切，尤其可以为肝癌早期诊断和分子治疗提供理论依据。
【关键词】 SD大鼠；肝脏癌变；T3；T4
[Abstract] Objective To probe the change and significance of the serum level of T3, T4 in cancerosis of rat liver. Methods The model of precancerosis of rat liver was induced by DENA. The blood was collected on the 14th day, the28th day, the 56th day ,the77th day ,the105th day and the112th day after the rats were administrated. The ridioimmunoassay was applied to test the serum level of T3, T4. The results were analysed by SPSS. Results The conticence of T3 .T4 rise ,then dicrease at different extent. Conclusion The level of T3 and T4 both decreaced after a temporary increace. Our results indicates that T3,T4is greatly related to the hepatocarcinogenasis. It can aslo be used for early diagnosis and a target for moleculer therapy.
[Keywords] SD rat;  cancerosis;  T3;  T4
        原发性肝癌（primary hepatic cancer,PHC）简称肝癌，是世界流行最广的十大恶性肿瘤之一，在我国是第三位常见的恶性肿瘤。肝癌由于其恶性度高，发展迅速，治疗困难，死亡率高，因此，针对肝癌的发病特点采取积极有效的预防措施，或采取积极有效的检测手段早发现，早治疗，以此降低肝癌的发生率显得尤为必要。
        在肝癌变的过程中甲状腺激素在血清中的含量变化明显，因为甲状腺激素的转化、代谢均需肝脏参与作用，两者之间关系密切。本实验研究血清中T3 、T4含量变化与肝癌变的关系。
        二乙基亚硝胺（DENA）是常用的诱癌剂，与肝脏有较强的亲和力。
        甲状腺激素是酪氨酸的碘化物，主要有两种，即甲状腺素，也称四碘甲腺原氨酸（T4）和三碘甲腺原氨酸（T3）两种。合成甲状腺激素的主要原料是碘和甲状腺蛋白。甲状腺激素的生物学作用十分广泛，其主要作用是促进物质与能量代谢，促进生长及发育过程。
        放射免疫分析方法Radiommunoassay(RIA)是研究体内产生的有机化合物及有机药物和毒物的体内过程及生理病理意义的最主要手段之一，以探索生命本质及其物质基础，加强人们对正常生理生化及病理学过程的认识，进行生物医学研究。本方法的使用面不断扩大，方法不断改进，它在近代生物学和医学发展上起着重要作用。如今，绝大多数内分泌激素都可用RIA测定，如测定胰岛素、生长激素、三碘甲腺原氨酸（T3）、四碘甲腺原氨酸（T4）、促甲状腺激素等等。
        本研究建立大鼠肝癌变进程不同时期的动物模型，测定血清T3 、T4含量变化，探讨其与肝脏癌变的关系。
        1  材料与方法
        1.1  实验动物
        SD大鼠，清洁级，雄性，体重（112±25） g，由河南师范大学动物房提供。共78 只，随机分为处理组58 只，对照组20 只。
        1.2  主要试剂及仪器
        1.2.1  主要试剂
        二乙基亚硝胺（diethylnitrosamine，DENA）（购于sigma公司）、T3放射免疫试剂盒、T4放射免疫试剂盒（均购于北京北方生物技术研究所）。
        1.2.2  主要仪器
        半自动生化分析仪（CL-770，日本岛津）。
        1.3  动物模型的建立
        实验组以1%的DENA水溶液灌胃，剂量为70mg/kg体重，每周一次，连续15周后正常饲养一周。对照组灌以相同剂量的生理盐水。
        1.4  取材
        分别从诱癌之日起，在14 d、28 d、56 d、77d、105 d、112 d 分6 批处死大鼠。每批13 只：处理组10 只，对照组3只。摘眼球取血，每只5 ml，室温静置2 h，4 oC低温离心35 min（3000 rpm），吸取血清，-20 ℃保存、备测。采血后立即处死大鼠，取其肝脏，用生理盐水洗净，用10%福尔马林固定16～20 h，投入70%酒精中备用，制作病理切片。
        1.5  方法
        以常规方法制作病理切片，HE染色，观察大鼠肝细胞形态的变化。
        用放射免疫法对T3、T4的含量进行检测。
        1.5.1  统计处理
        用SPSS软件对检测结果进行t检验。
        2  结果
        2.1  病理结果
        病理组织切片观察发现，处理组大鼠第14 d的肝小叶结构基本正常，有某些散在的肝细胞比对照组的细胞核略大，肝汇管区和肝内血管周围有轻度的炎细胞浸润。28 d肝细胞核较之14 d更大，染色较深，炎细胞从汇管区向周围组织浸润，但均未见明显结节形成。56 d肝小叶结构全部或部分消失，出现大小不等的结节，其中8例为结节状增生，结节内由排列紊乱的肝细胞样细胞组成，2 例并发嗜碱性结节，结节内细胞排列紧密，核大而深染，有不同程度的异型性，胞浆嗜碱性。77 d全部表现为结节状增生并发嗜碱性结节状增生，结节数目增多，面积增大，同时伴有胆管上皮增生。105 d部分例数出现胆管上皮癌，特点为异型的肿瘤，细胞排列成管状或乳头状，且向肝实质浸润，核内染色质凝集呈空泡状。112 d全部出现胆管上皮癌。
   2.2  T3、T4血清含量的检测结果（见表1）
         
        T3、T4含量呈不同程度的先升后降的变化。T3在14 d高于对照组，差异极显著（P<0.01），之后急剧下降，28、56、77、105 d低于对照组，差异均显著（P<0.05），112 d仍低于对照组，但无显著差异；T4含量在28 d达到最大值，显著高于对照组（P<0.05），而后大幅度下降，56、77、105、112 d低于对照组，差异均极显著（P<0.01）；
        3  讨论
        3.1  T3、T4与肝癌
        肝脏作为甲状腺激素的主要代谢场所及制造甲状腺激素结合蛋白的器官，对甲状腺激素的调控有重要作用。肝脏疾患时，甲状腺激素的转化及代谢将受到影响。有研究显示血清T3、T4的下降与肝病严重程度相平行[1]，且随病情变化而变化。本研究发现，在肝细胞癌变进程中，实验组与对照组相比T3、T4含量呈不同程度的先升后降的变化。与以往研究相吻合。
        在大鼠肝癌前病变早期T3、T4的表达先后显著增高，可能与早期细胞增生有密切关系。诱癌物质刺激机体发生生理生化变化，是否通过导致机体产生过量的甲状腺激素而促癌，有待证实。
        随着癌变进程，T3、T4含量先后显著下降，可能的原因有：①病变程度加重，正常肝小叶消失，发生结节状增生并逐渐并发嗜碱性结节，组织完整性被破坏，甲状腺结合抑制蛋白大量渗入血液循环，可抑制T3、T4与甲状腺激素结合蛋白（TBG）结合，导致低T3、T4血症。②重症肝病时，门静脉高压，胃肠道淤血，食欲减退，造成碘摄入不足，甲状腺摄碘不足，甲状腺激素生成减少，血中FT3（游离T3）、FT4（游离T4）亦相应减少。③严重肝病时机体能量代谢障碍，ATP摄取不足影响到碘摄取这一耗能过程，影响激素的合成。④部分肝病可能由于自身免疫损害甲状腺功能，从而使甲状腺合成和分泌减少。
        诱癌112 d，T3含量仍低于对照组，但无显著差异。此变化可能与癌变导致一系列恶病质如食欲不振、免疫力下降、正常蛋白合成能力下降、机体代谢紊乱等有关，尚待进一步研究证实。
参考文献
[1]徐晓妹,卢振芳,何娟,等.恶性肿瘤患者甲状腺激素的变化及意义[J].山东医药,1999,39(8):9-10.